UPLC-MS Analysis of 20 Amino Acids Using the Kairos Amino Acid Kit for Biomedical Research

Význam tématu

Rychlá a spolehlivá analýza aminokyselin je klíčová v biomedicínském výzkumu a klinické diagnostice. Aminokyseliny slouží jako biomarkery metabolických stavů, chorob a terapeutických intervencí. Moderní chromatografické metody s hmotnostní detekcí umožňují přesnou kvantifikaci desítek analytů během několika minut, čímž zvyšují efektivitu laboratorních procesů.

Cíle a přehled studie / článku

Studie hodnotila výkonnost Kairos Amino Acid Kit pro kvantitativní analýzu 20 biologicky relevantních aminokyselin v roztoku do koncentračního rozsahu normálních fyziologických hladin během méně než 10 minut. Zaměřila se na parametry jako linearita, citlivost, přesnost, mezidenní a nitrodenní variabilita a přesnost stanovení vůči referenčnímu materiálu NIST SRM 2389a.

Použitá metodika

Pro přípravu vzorků se uplatnila derivatizace pomocí AccQ-Tag Ultra 3X derivatizačního kitu v borátovém pufru, následně se analyzovalo pomocí reverzní chromatografie na CORTECS UPLC C18 kolonce (1,6 µm, 2,1 × 150 mm). Mobilní fáze sestávala z vody a acetonitrilu, obojí s 0,1 % kyseliny mravenčí. Gradientní eluce byla nastavena na 9 minutový běh. Detekce probíhala v režimu Single Ion Recording (SIR) na ACQUITY QDa hmotnostním detektoru v pozitivním ionizačním režimu.

Použitá instrumentace

• ACQUITY UPLC H-Class System
• CORTECS UPLC C18 kolona, 1,6 µm, 2,1 × 150 mm
• ACQUITY QDa Mass Detector
• MassLynx v4.1 a TargetLynx Software

Hlavní výsledky a diskuse

Analytické parametry vykázaly:

• Nitrodenní a mezidenní přesnost (%CV) ≤12,0 % a ≤14,7 %.
• Linearity (r²) >0,99 pro všechny aminokyseliny v rozsahu kalibrace.
• Mez detekce (LOQ) ≤4 µM s poměrem signál/šum ≥10.
• Akurátnost stanovení vůči panelu vzorků do ±12,3 % biasu a NIST SRM 2389a do ±8,9 %.
• Nízké carryover s detektorovou odpovědí ≤20 % signálu nejnižší kalibrátorové úrovně.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí krátký analytický čas (<10 min), robustnost a vysokou selektivitu pro izobarické aminokyseliny. Derivatizace bez potřeby iontově párovacích činidel umožňuje použití jednoho UPLC systému pro různé aplikace. Vysoká přesnost a citlivost zajišťují spolehlivé výsledky v biomedicínských laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možnost rozšíření počtu analyzovaných aminokyselin nebo dalších metabolitů, integrace s automatizovanou přípravou vzorků a pokročilými datovými platformami. Trendem je využití umělé inteligence pro zpracování dat a vyhodnocení komplexních metabolických profilů s cílem personalizované medicíny.

Závěr

Kairos Amino Acid Kit v kombinaci s ACQUITY UPLC/QDa systémem poskytuje rychlou, přesnou a citlivou analýzu 20 aminokyselin v normálním fyziologickém rozsahu. Metoda je vhodná pro rutinní biomedicínské aplikace, kde je klíčová efektivita a spolehlivost výsledků.

Reference

Bez uvedených explicitních literárních odkazů.