OPTIMIZED PASS-THROUGH SPE CLEANUP FOR LC-MS/MS MULTI-RESIDUE VETERINARY DRUG ANALYSIS

Význam tématu

Veterinární rezidua léčiv v mase představují významné riziko pro spotřebitele i regulátory. Spolehlivé a rychlé metody pro kvantifikaci širokého spektra farmak zajišťují bezpečnost potravin a vyhovění legislativním limitům. Moderní LC-MS/MS metody umožňují detekci stovek látek s vysokou citlivostí, avšak vyžadují optimální přípravu vzorku k odstranění interferentů, zejména tuků a fosfolipidů.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo optimalizovat jednoduchý pass-through SPE protokol s kartridžemi Oasis PRiME HLB pro extrakci a čištění vzorků hovězího masa před analyzátorem LC-MS/MS. Autoři testovali návrh experimentu na třech modelových sloučeninách různé polarity (bithionol, niclosamid, oxyfenbutazon) a posuzovali vylučování fosfolipidů a tuků.

Použitá instrumentace

• UPLC systém ACQUITY UPLC H-Class s kolonnou BEH C18 (2,1 × 100 mm).
• Mobilní fáze A: 0,1 % kyselina formiová ve vodě; fáze B: 0,1 % kyselina formiová v methanolu.
• Injekční objem 7 μL, teplota kolony 40 °C.
• MS detektor Waters Xevo TQ-S micro pracující v režimu MRM s ESI+ a ESI– podle analyzované sloučeniny.

Použitá metodika

Vzorek 2 g hovězího masa se extrahoval 15 mL acetonitril–voda (85:15, 0,2 % kyseliny formiové), homogenizoval a centrifugoval. Následně byl extrakt naředěn 1:1 acetonitrilem k dosažení ~85 % organické fáze. Pro čištění se použily Oasis PRiME HLB SPE kartridže (3 cc, 150 mg):

• Odfiltruje se prvních 2 mL eluátu do odpadu (obsahuje polární látky a méně retencio­vané analyty nedosahující maxima eluce).
• Dalších 3 mL jsou sbírány do analytické frakce.

Testovací design zahrnoval odběr šesti po sobě jdoucích 1 mL frakcí pro stanovení procentuálního výtěžku analyzátů a míry odstranění tuků a fosfolipidů.

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizace ukázala, že:

• Oxyphe­nylbutazon dosahuje maximálního výtěžku po průtoku ~2 mL.
• Bithionol a niclosamid se plně elují až při ~4 mL průtoku.
• Průlom tuků a fosfolipidů nastává až po ~6 mL, což potvrzuje selektivní zadržení interferentů.
• Výtěžky ze souboru 39 analyzovaných veterinárních léčiv se pohybovaly nad 80 % v rozsahu koncentrací 10–100 µg/kg (n=18), s nízkou variabilitou (SD).

Čištění bylo stejně účinné ručně i na vakuovém manifoldu. Další test s potravinářským olejem potvrdil i účinné odstranění nepolárních lipidů.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí výrazné zjednodušení přípravy vzorku oproti tradičním víceúrovňovým protokolům. Výhody:

• Krátká doba přípravy a snadná automatizace.
• Vysoká reprodukovatelnost a minimalizace ztrát analyzátů.
• Účinné odstranění tuků a fosfolipidů vede ke snížení údržby LC-MS systému.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření SPE „pass-through“ technik pro různé typy matric (mléko, vejce, ryby). Vývoj kartridží se zaměřením na specifické třídy interferentů a kombinace s on-line SPE dávají šanci na plně integrované automatizované systémy QC v potravinářství.

Závěr

Optimalizovaný pass-through cleanup s Oasis PRiME HLB kartridžemi představuje efektivní, robustní a univerzální přístup k přípravě vzorků pro multi-reziduální LC-MS/MS analýzu veterinárních léčiv v mase. Metoda dosahuje vysokých výtěžků, minimalizuje interferenty a zkracuje dobu analýzy.

Reference

Michael S. Young, Melvin Blaze, Jeremy C. Shia. Optimized Pass-Through SPE Cleanup for LC-MS/MS Multi-Residue Veterinary Drug Analysis. Waters Corporation, 2019.