Quantitation of Pyrrolizidine Alkaloids in Honey and Herbal Teas by UHPLC/MS/MS

Význam tématu

Stopy pyrrolizidinových alkaloidů (PA) v medu a bylinných čajích představují závažné zdravotní riziko vzhledem k jejich hepatotoxicitě a karcinogenním účinkům. Pravidelný monitoring těchto přírodních toxinů je klíčový pro ochranu spotřebitele a dodržení zásad ALARA (tak nízko, jak je rozumně dosažitelné).

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout a validovat citlivou a uživatelsky přívětivou UHPLC-MS/MS metodu pro kvantifikaci 28 pylrolizidinových alkaloidů v medu a bylinných čajích. Metoda zahrnuje jednoduchou kyselou extrakci, následné čištění na silně kationtové SPE, chromatografickou separaci a detekci ve třetí generaci triple kvadrupólového hmotnostního spektrometru.

Použitá metodika a instrumentace

• Extrakce vzorků: 0,05 M kyselina sírová, ohřev na 50 °C a sonikace (čaje)
• Čištění SPE: Agilent Bond Elut SCX (500 mg), přepláchnutí vodou a methanolem, eluace amoniakem v methanolu
• UHPLC: Agilent 1260 Infinity, kolona Poroshell 120 EC-C18 (2,1×100 mm, 2,7 µm), gradient formiát/ammonium formiát ve vodě a methanolu
• MS/MS detekce: Agilent 6490 iFunnel triple quad, pozitivní ESI, dynamický MRM, tři přechody na sloučeninu
• Kalibrace: maticově-korekční kalibrace v rozsahu 1–100 µg/kg (med), 5–500 µg/kg (čaje)

Hlavní výsledky a diskuse

LOQ 1 µg/kg pro med a 5–10 µg/kg pro bylinné čaje. Linearity R²>0,996. Extrakční výtěžky 80–120 % u medu, 70–85 % u čajů. Matricové efekty (až 60 % potlačení signálu) kompenzovány pomocí maticově-korekční kalibrace. Analýza 24 vzorků rooibos čaje ukázala koncentrace 143–2300 µg/kg, nejčastěji senecioninový typ PA (Retrorsine, Senecionine, Seneciphylline a jejich N-oxidy).

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoce citlivé simultánní stanovení desítek PA v komplexních maticích
• Adaptovatelné na další rostlinné a potravinářské vzorky
• Podpora rutinního monitoringu a kvalitativní kontroly v potravinářství

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se aplikace metody na širší škálu sekundárních metabolit a kombinované rutinní sledování dalších rizikových látek. Další vývoj budou stimulovat nové ionizační techniky a miniaturizované extrakční přístupy, které zvýší propustnost a sníží spotřebu vzorku.

Závěr

Představená UHPLC-MS/MS metoda je rychlá, robustní a dostatečně citlivá pro kvantifikaci pylrolizidinových alkaloidů v medu a bylinných čajích. Splňuje požadavky na nízké meze stanovitelnosti a podporuje efektivní sledování těchto toxinů v souladu s evropskými doporučeními.

Reference

• BfR Opinion 028/2007 Salad mix contaminated with groundsel containing pyrrolizidine alkaloids
• Betteridge K et al J Agric Food Chem 2005 Improved method for extraction and LC-MS analysis of PAs in honey
• EFSA CONTAM Panel 2011 Scientific Opinion on Pyrrolizidine alkaloids in food and feed
• BfR Method BFR-PA-Honey-1.0/2013 Determination of PAs in honey by SPE-LC-MS/MS
• BfR Method BFR-PA-Tea-2.0/2014 Determination of PAs in plant material by SPE-LC-MS/MS