LC-MS/MS Method for Analysis of Pyrrolizidine Alkaloids (PAs) in Herbal Teas

Význam tématu

Pyrrolizidinová alkaloida jsou přírodní toxické látky produkované rostlinami jako obranný mechanismus. Mohou poškodit lidskou játra a některé jsou klasifikovány jako možná karcinogeny. Vzhledem k nedostatku bezpečnostních limitů pro bylinné čaje v některých zemích je důležité vyvinout spolehlivou metodu pro jejich sledování.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a ověřit simultánní LC-MS/MS metodu pro kvalitativní i kvantitativní stanovení 28 pyrrolizidinových alkaloidů v bylinných čajích. Studie zahrnovala optimalizaci předúpravy vzorku, chromatografických i hmotnostních podmínek a validaci výkonnostních parametrů.

Použitá metodika

Vzorky bylinných čajů byly homogenizovány a extrahovány 50% methanolovým roztokem s 0,05 M kyselinou sírovou. Po centrifugaci se extrakt podrobil SPE na MCX koloně, eluován 5% amoniakovým methanolem, koncentrován dusíkem a rekonstituován v 5% methanolu. Validace zahrnovala stanovení linearity, meze kvantifikace (LOQ), obnovitelnosti a opakovatelnosti.

Použitá instrumentace

Likvidní chromatograf Nexera X3 s kolonkou Shim-pack GIST C18 HP (2.1×100 mm, 3 μm). Mobilní fáze: voda s 0.1% kyseliny mravenčí a 5 mM formiátu amonného, methanol se stejnou přísadou, gradientní eluce 0–25 min, průtok 0.3 mL/min, teplota 30 °C, objem injekce 10 μL. Hmotnostní spektrometr LCMS-8060 v režimu ESI pozitivní, MRM: interface 400 °C, DL 300 °C, heat block 400 °C, plynové toky – nebulizační 3 L/min, sušicí 5 L/min, ohřívací 15 L/min.

Hlavní výsledky a diskuse

Chromatogram standardní směsi (10 ng/mL) ukázal dobře rozlišené píky všech 28 alkaloidů. Kalibrační přímky v matrici vykázaly koeficienty determinace r2 ≥ 0.99. Obnovitelnost se pohybovala mezi 75 a 115 % při RSD ≤ 17 %. LOQ jednotlivých látek ležely v rozsahu 0.1–8.5 ng/g, závisle na struktuře alkaloidu.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlé a spolehlivé simultánní stanovení 28 pyrrolizidinových alkaloidů.
• Vysoká citlivost a přesnost vhodná pro kontrolu kvality bylinných čajů.
• Podpora tvorby a ověřování bezpečnostních limitů v potravinářském a farmaceutickém průmyslu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možné rozšíření metody na další matrice, jako jsou med a včelí produkty, použití vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie pro identifikaci neznámých alkaloidů, automatizace předúpravy vzorků a další zlepšení LOQ.

Závěr

Byla úspěšně ustanovena a ověřena LC-MS/MS metoda pro simultánní stanovení 28 pyrrolizidinových alkaloidů v bylinných čajích pomocí LCMS-8060. Metoda splňuje požadavky na linearitu, citlivost, obnovitelnost i opakovatelnost a představuje užitečný nástroj pro zabezpečení kvality a bezpečnosti potravin.

Reference

1 Determination of pyrrolizidine alkaloids PA in plant material by SPE LC MS MS BfR PA Tea 2 0 2014