Chiral Analysis of Aromatic Amino Acids with Agilent InfinityLab Poroshell 120 Chiral-T Columns

Význam tématu

Aromatické aminokyseliny se v tělech organismů vyskytují ve dvou enantiomerních formách, které mohou mít odlišné biologické vlastnosti a farmakologické účinky. Spolehlivá chirální separace D- a L-enantiomerů je proto zásadní v biochemii, farmaceutickém výzkumu i potravinářském průmyslu. Moderní chromatografické metody umožňují přesnou detekci a kvantifikaci těchto enantiomerů bez nutnosti derivatizace.

Cíle a přehled studie

Cílem Application Note bylo ověřit schopnosti kolony Agilent InfinityLab Poroshell 120 Chiral-T k rozdělení čtyř aromatických aminokyselin (tryptofan, fenylalanin, tyrosin) ve formě D- a L-enantiomerů. Testy zahrnovaly optimalizaci mobilní fáze kompatibilní s reverzní fází a vhodnou pro MS, a detekci pomocí ELSD a UV diodové array detektoru.

Použitá metodika a instrumentace

• LC systém: Agilent 1290 Infinity II s flexibilním pumpou a kapilárním autosamplerem.
• Teplotní jednotka: Multicolumn Thermostat pro stabilizaci kolony na 30 °C.
• Chirální kolona: InfinityLab Poroshell 120 Chiral-T, 2,1 × 100 mm, částice 2,7 μm.
• Detektory: ELSD pro univerzální citlivou odezvu; DAD pro selektivní detekci při 220–280 nm.
• Mobilní fáze: 70 % methanol / 30 % 25 mM amonného formiátu, pH 3,0.
• Průtok: 0,21 mL/min; objem injekce: 1 μL; koncentrace vzorku: 2 mg/mL (50 % u tyrosinu).

Hlavní výsledky a diskuse

Ve všech případech L-enantiomer elutoval před D-formou s hodnotami selektivity 1,45–1,50 a hodnotami Rs > 2,5. Separation probíhala do 4 minut s vysokou účinností (N > 3000 pro některé analyty). ELSD umožnil univerzální detekci, zatímco UV-DAD poskytl spektrální informace pro ověření identity látek.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a robustní chirální analýza aromatických aminokyselin bez derivatizace.
• Možnost přímé integrace do laboratoří používajících reverzní fázi a MS-přátelské mobilní fáze.
• Kombinace ELSD a UV-DAD zvyšuje spolehlivost kvalifikace i kvantifikace enantiomerů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření použití superficially porous částic v dalších chirálních fázích a aplikacích, včetně vysokorychlostních screeningů v peptidovém a proteomickém výzkumu. Možnosti online hyphenace s hmotnostní spektrometrií dále zvýší selektivitu a citlivost analýz.

Závěr

Kolona Agilent InfinityLab Poroshell 120 Chiral-T prokázala vysokou účinnost i rozlišení při separaci D- a L-enantiomerů aromatických aminokyselin. Metoda je vhodná pro QC i výzkumné účely v oblasti farmacie, biochemie a potravinářství.

Reference

• W. J. Long, Agilent InfinityLab Poroshell 120 Chiral-T Application Note 5994-1377EN, Agilent Technologies, 2019.