Fast and Easy Injection of Large Sample Volumes in Preparative HPLC

Význam tématu

Preparativní HPLC je klíčovou technikou pro získávání čistých sloučenin z komplexních směsí. Efektivní vpravení velkých objemů vzorku přímo na kolonu zvyšuje produktivitu a eliminuje potřebu samostatných injektovacích modulů. Vestavěná injekční pumpa s voličem rozpouštědel u Agilent 1290 Infinity II poskytuje flexibilní řešení pro vysoce objemové aplikace.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie je demonstrovat využití Agilent 1290 Infinity II Preparative Binary Pump jako vysokokapacitní injekční pumpy pomocí integrovaného voliče rozpouštědel. Autoři popisují nastavení metod pro načítání a eluci vzorku, hodnotí přesnost a reprodukovatelnost injekcí a prezentují výkonnostní charakteristiky při objemech až 100 mL.

Použitá metodika a instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II Preparative Binary Pump (G7161B) s výměnnými pumpovými hlavami umožňujícími průtoky 1–200 mL/min a solvenčním voličem (option #206).
• Agilent 1260 Infinity II Diode Array Detector WR (G7115A) s preparativní průtokovou kyvetou (option #084).
• Agilent 1260 Infinity II Preparative Valve-Based Fraction Collector (G7166A).
• Kolona Agilent Prep-C18, 30 × 150 mm, 10 µm (p/n 413910-302).
• Software Agilent OpenLab CDS ChemStation C.01.09 [144].
• Mobilní fáze: voda a acetonitril LC-grade, vzorek obsahuje kofein a čtyři parabeny ředěné 1:200.
• Parametry metody: objem injekce 100 mL, průtok 50 mL/min při eluci, detekce UV při 254 nm, sběr frakcí na základě prahové hodnoty.

Hlavní výsledky a diskuse

Přesnost injekcí při rychlostech 25, 50 a 100 mL/min se pohybovala na úrovni RSD 0,024–0,097 % a průměrné objemy byly blízké deklarovaným 100 mL. Chromatogramy ukázaly stabilní retenční časy (RSD <0,53 %) a oblasti píků (RSD <0,27 %). Vestavěný solvenční ventil usnadnil rychlý přechod mezi načítáním a elucí a umožnil efektivní proplach pumpového kanálu, čímž se minimalizovalo riziko kontaminace.

Přínosy a praktické využití metody

• Eliminace samostatné injekční pumpy či autosampleru, úspora místa a investičních nákladů.
• Zrychlení procesu načítání vzorku díky vysokému průtoku až 150 mL/min.
• Flexibilita v nastavení různých průtoků pro načítání a eluci v rámci jedné sekvence metod.
• Podpora automatického sběru frakcí s vysokou reprodukovatelností a spolehlivostí.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření vestavěných injekčních systémů v preparativních LC soustavách. Integrace s pokročilými fraction collectory, inteligentní řídicí softwary a adaptace pro různé typy rozpouštědel a vzorků podpoří automatizaci a optimalizaci přípravy čistých látek.

Závěr

Agilent 1290 Infinity II Preparative Binary Pump prokázala schopnost přesně a reprodukovatelně vpravit velké objemy vzorku přímo na kolonu. Využití solvenčního voliče jako injekčního modulu přináší praktické a ekonomické výhody bez nutnosti dodatečné instrumentace a zvyšuje efektivitu preparativní HPLC.

Reference

1. Agilent InfinityLab LC Series 1260 Infinity II Preparative Autosampler, Agilent Technologies User Manual, 2017.