Analysis of Anti-epileptic Drugs with the Agilent 1290 Infinity II LC

Význam tématu

Monitorování a kvantifikace protiepileptik je zásadní pro zajištění kvality a stability farmaceutických přípravků. Rychlé a citlivé chromatografické metody umožňují efektivní kontrolu složení, úsporu času, rozpouštědel i vzorků a podporují vysokou propustnost laboratoře.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo převést klasickou HPLC metodu pro analýzu sedmi protiepileptik a referenčního kofeinu na ultrarychlou UHPLC separaci pomocí systému Agilent 1290 Infinity II. Studie porovnává tři chromatografické režimy z hlediska doby analýzy, spotřeby rozpouštědel, objemu vzorku a analytických parametrů (precize, linearita, LOD/LOQ, rozlišení).

Použitá metodika a instrumentace

Pro experimenty byl použit Agilent 1290 Infinity II LC systém vybaven:

• High-speed Pump G7120A
• Multisampler G7167B
• Multicolumn Thermostat G7116B
• Diode Array Detector G7117B (10 mm Max-Light buňka)

Columny:

• ZORBAX SB-C18 4.6×150 mm, 5 µm
• ZORBAX RRHT SB-C18 4.6×50 mm, 1.8 µm
• ZORBAX RRHD SB-C18 2.1×50 mm, 1.8 µm

Mobilní fáze: voda a acetonitril (gradientní eluce). Detekce při 204 nm (reference 360/80 nm). Software: Agilent OpenLAB CDS ChemStation Edition C.01.07. Jako vzorek sloužil standardní mix sedmi protiepileptik (25 ng/µL) a kofein.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda HPLC (4.6×150 mm) vyžadovala 25 min separace plus 15 min regenerace. Přesnost byla vynikající (RSD RT < 0.042 %, RSD plochy < 0.15 %).

Transfer na UHPLC (4.6×50 mm) zkrátil dobu cyklu na 13.5 min (úspora > 66 %), zachoval vysokou precizi (RSD RT < 0.085 %, RSD plochy < 0.42 %) a rozlišení srovnatelné s HPLC.

Optimalizace pro ultrarychlou separaci (2.1×50 mm) dosáhla doby analýzy pouhých 0.9 min (cyklus 2 min), úspory rozpouštědel 95 % a redukce objemu vzorku o 75 %. Přesnost RT byla < 0.1 % (výjimka primidon 0.186 %), RSD plochy < 0.5 %. Rozlišení fází u vysoké teploty (80 °C) zajišťovalo jasnou baseline separaci.

Linearity všech metod byla výborná (R² > 0.9999 ve většině případů). LOD/LOQ se u krátké UHPLC metody zlepšily více než 100× oproti HPLC, u ultrarychlé metody více než 10×.

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazné zrychlení analýzy a zvýšení propustnosti laboratoře
• Radikální snížení spotřeby rozpouštědel a nákladů na separaci
• Nižší objem vzorku, vhodné pro vzácné či drahé analýty
• Vynikající precize, linearita a citlivost vhodné pro QA/QC a stabilitní testování

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj směřuje k integraci UHPLC s hmotnostní spektrometrií pro vyšší selektivitu a citlivost. Miniaturizace chromatografie a automatizace přípravy vzorků umožní celkovou optimalizaci workflow v klinické a průmyslové analytice. Kombinace s umělou inteligencí může dále zkrátit dobu vyhodnocení dat a předpovědět stabilitu látek.

Závěr

Studie prokázala úspěšný převod konvenční HPLC metody pro protiepileptika na UHPLC formáty s výrazným zkrácením doby analýzy, úsporou rozpouštědel a vzorku při zachování nebo zlepšení analytických parametrů. Ultrarychlá metoda na 2.1 mm kolonce je ideální pro vysoce propustné aplikace s náročnými požadavky na citlivost a precizi.

Reference

1. Darwish HW et al. A Stability-Indicating HPLC-DAD Method for Determination of Stiripentol. Journal of Analytical Methods in Chemistry 2014; doi:10.1155/2014/638951.