Investigation of system performance – of the KNAUER AZURA® UHPLC system

Význam tématu

Rychlá a efektivní chromatografie s vysokým rozlišením je klíčová pro analýzu a kontrolu kvality léčiv. Zkrácení doby analýzy umožňuje zvýšit propustnost laboratoře a snížit náklady.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit výkon KNAUER AZURA UHPLC systému s novým binárním čerpadlem AZURA P 8.1L při separaci šesti sloučenin obsažených v protiepileptikách. Byly testovány čtyři různé průtoky v rozsahu 0.2 až 1.5 ml/min a hodnoceny parametry jako doba běhu, tlak, reproducibilita, symetrie, účinnost a rozlišení.

Použitá metodika a instrumentace

• Systém: KNAUER AZURA UHPLC s čerpadlem AZURA P 8.1L (max. tlak 1240 bar)
• Autosampler: AZURA AS 6.1L, tlak do 1240 bar, objem smyčky 10 µl
• Detektor: AZURA DAD 6.1L, detekce při 204 nm
• Kolona: Agilent Zorbax SB-C18 RRHD, 2.1×50 mm, 1.8 µm
• Objem mezi injektorem a detektorem (ECV): 9 µl
• Eluenty: voda (A) a acetonitril (B), teplota 60 °C, gradientní program
• Vzorek: směsný standard 0.01 mg/ml v acetonitril:voda 15:85, objem injekce 2 µl

Hlavní výsledky a diskuse

• Redukce doby analýzy z 7 min na 1.6 min při průtoku 0.2 → 1.5 ml/min (snížení o 77 %)
• Tlak vzrostl z 120 bar na 1000 bar
• Reprodukce zadržovací doby RSD < 0.60 s pro všechny sloučeniny
• Symetrie píků se při vyšších průtocích mírně zlepšila
• Nejlepší účinnost (minimální HETP) při průtoku 0.6 ml/min podle Van Deemterovy křivky
• Rozlišení kritické dvojice karbamazepin–fenytoin kleslo z 1.17 na 0.91, stále hodnotné pro kvantifikaci

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje výrazné zrychlení analýz s udržením vysokého rozlišení a přesnosti. Vhodná pro rutinní kontrolu kvality a výzkumné laboratoře zaměřené na farmaceutické sloučeniny.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další snižování objemu systému, zvýšení pracovních tlaků nad 1200 bar a integrace s hmotnostní spektrometrií. Adaptivní kompenzace pulzací a optimalizace pulsního chování přinesou další zlepšení přesnosti.

Závěr

KNAUER AZURA UHPLC systém s čerpadlem P 8.1L prokázal flexibilitu a vysokou výkonnost při různých průtocích, což umožňuje vysokou propustnost a spolehlivou separaci protiepileptik.

Reference

1. Waters Corporation. ACQUITY UPLC I-Class: Optimized System Dispersion for Ultimate UPLC Performance. Waters Corporation, 2011.
2. Waters Corporation. Optimized System Dispersion for UPLC Performance in a Versatile LC Design. Waters Corporation.
3. Ahmad et al. A 14 Parameter Study of UHPLC for Method Development Transfer and Troubleshooting. Journal of Chromatography A, 2017.