Analysis of Hydroxychloroquine and Metabolites in Human Whole Blood Using the Agilent Captiva EMR—Lipid by LC/TQ

Význam tématu

Přesná a spolehlivá kvantifikace hydroxychlorochinu a jeho metabolitů v lidské plné krvi je klíčová pro farmakokinetické studie, terapeutický monitoring a toxikologické hodnocení.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout a validovat metodiku pro simultánní kvantitativní analýzu HCQ, desethylhydroxychlorochinu (DHCQ), desethylchlorochinu (DCQ) a bis-desethylchlorochinu (BDCQ) v plné krvi. Vzorky byly připraveny precipitací bílkovin a následnou lipidovou očistou pomocí Agilent Captiva EMR—Lipid, poté analyzovány LC/TQ.

Použitá instrumentace

• LC: Agilent 1290 Infinity II se sloupcem ZORBAX Eclipse XBD-C8 (2.1×50 mm, 3.5 µm).
• MS: Agilent 6470 Triple Quadrupole s ESI v pozitivním režimu, MRM detekce.
• Matriční očista: Agilent Captiva EMR—Lipid 96-well plate, PPM-96 pozitivní tlakový manifold, kolekční destičky a těsnicí zátky.

Použitá metodika

• Do 100 µL plné krve se přidal vnitřní standard HCQ-d4 a standardní kalibrace.
• Vzorek se naředil vodou, zasadyfikoval NH4OH, precipitoval 1 mL studeného 95/5 ACN/MeOH a centrifugoval.
• Supernatant dvakrát eluován přes Captiva EMR—Lipid za nízkého tlaku, následovalo promytí a vysušení pod vakuem.
• Rekonstrukce v 95/5 ACN/voda s 0,1 % formiátovým pufrem, vortex, sonikace a centrifugace před injekcí.

Hlavní výsledky a diskuse

• Přesnost analýzy se pohybovala v mezích 98–108 % a preciznost (CV) ≤ 10 % pro všechny analyty.
• Obnova analytů > 80 % a matriční efekt pod kontrolou, zajišťující spolehlivé výsledky.
• Lineární kalibrační křivky s R2 > 0,995 v rozsahu 1–120 ng/mL.
• Rychlá analýza (<10 minut chromatografie) a vysoká opakovatelnost.

Přínosy a praktické využití metody

• Simplifikované vzorkování a efektivní odstraňování lipidových interferentů.
• Vhodné pro farmakokinetické studie, terapeutický monitoring a toxikologii léčiv.
• Metoda umožňuje zpracovat vyšší počet vzorků s minimálními manuálními kroky.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace přípravy vzorků a rozšíření workflow pro vysokopropustné laboratoře.
• Adaptace postupu na další skupiny léčiv s podobnými matricemi.
• Integrace s vysoce výkonnými MS systémy pro screening nových metabolitů.

Závěr

Stanovená metoda pro analýzu HCQ a metabolitů v plné krvi je robustní, rychlá a reprodukovatelná. Poskytuje vysokou přesnost, preciznost a účinné potlačení maticového vlivu, což ji předurčuje pro široké využití v klinickém výzkumu.

Reference

• Žádné explicitně citované literární zdroje uvedeny.