Method Transfer from an Agilent 1100 Series LC to an Agilent 1260 Infinity II LC

Význam tématu

Transfer analytických metod mezi různými generacemi kapalinových chromatografů se stává nepostradatelnou součástí farmaceutické praxe a QA/QC procesů. Umožňuje zkrátit dobu validace, snížit náklady a zajistit reprodukovatelnost výsledků při analýze β-laktamových antibiotik s penicilinovou strukturou.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo demonstrovat bezproblémový přenos standardní HPLC metody z Agilent 1100 Series Binary LC na Agilent 1260 Infinity II LC a dále její adaptaci na UHPLC podmínky se zachováním stejných retenčních časů a rozlišení sloučenin. Studie se zaměřila na amoxicilin, ampicilin, penicilin G a penicilin V.

Použitá metodika a instrumentace

Pro konvenční HPLC byla využita Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 kolona (4.6×150 mm, 5 µm) s gradientem 5 až 60 % acetonitrilu v 25 mM KH2PO4 pH 3 během 24 minut, při průtoku 1.5 mL/min a detekci při 204 nm. UHPLC podmínky zahrnovaly InfinityLab Poroshell EC-C18 kolonu (4.6×100 mm, 2.7 µm), gradient 5 až 60 % během 8 minut, průtok 3.0 mL/min, detekci 204 nm. Použité přístroje zahrnovaly Agilent 1100 Series Binary LC moduly (pumpa, autosampler, kolona, DAD) a odpovídající moduly 1260 Infinity II LC (binary pump, vialsampler s chlazením, DAD). Analýzu a řízení přístrojů zajišťoval Agilent OpenLAB CDS verze 2.1.

Hlavní výsledky a diskuse

Přenos HPLC metody prokázal maximální odchylku retenčních časů do 0.6 % a obdobné rozlišení a přesnost ploch (RT RSD <0.1 %, Area RSD <0.4 %). Adaptace na UHPLC přinesla zkrácení doby analýzy o 67 %, snížení spotřeby mobilní fáze o 33 % a mírné zvýšení rozlišení separací.

Přínosy a praktické využití metody

Popsaný postup usnadňuje rychlou validaci přenesených metod, zvyšuje laboratorní propustnost a snižuje provozní náklady díky úspoře času a rozpouštědel. Výsledky jsou plně srovnatelné mezi přístroji, což umožňuje flexibilní využití existujících metod.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření instrument-to-instrument přenosu do dalších tříd léčiv a kombinace se softwarovou automatizací. Nárůst poptávky po ekologičtějších metodách podpoří další rozvoj UHPLC technologií a Green Analytical Chemistry.

Závěr

Přenos HPLC metody z Agilent 1100 na 1260 Infinity II a její adaptace na UHPLC prokázaly plnou ekvivalenci a výrazné úspory času a rozpouštědel. Studii lze využít jako modelový příklad pro efektivní přenos a optimalizaci metod v analytické praxi.

Reference

• Rambla-Alegre et al. Application of a liquid chromatographic procedure for the analysis of penicillin antibiotics in biological fluids and pharmaceutical formulations using sodium dodecyl sulphate/propanol mobile phases and direct injection, J. Chromatog. A 2011, 1218, 4972–4981.
• Bailón-Pérez et al. Trace determination of 10 β-lactam antibiotics in environmental and food samples by capillary liquid chromatography, J. Chromatog. A 2009, 1216, 8355–8361.
• Dousa; Hosmanová. Rapid determination of amoxicillin in premixes by HPLC, J. Pharm. Biomed. Anal. 2005, 37, 373–377.
• Agilent 1290 Infinity with ISET, Agilent Technologies User Manual, 2015, publication number G4220-90314.