Performance Evaluation of the Agilent 1290 Infinity II High Speed Pump using Phosphate Buffer as Mobile Phase

Význam tématu

Úprava pH mobilní fáze pomocí fosfátového pufru je zásadní pro zajištění optimální selektivity a rozlišení ionizovatelných sloučenin v RP HPLC. Stabilní a přesně definované pH minimalizuje variabilitu retence a tvaru špiček, což je klíčové pro spolehlivou kvantifikaci biologicky aktivních látek a monitorování kvality farmaceutických přípravků.

Cíle a přehled studie

Cílem této technické studie bylo ověřit výkon Agilent 1290 Infinity II High Speed Pump při použití 25 mM fosfátového pufru (pH 3,0) v mobilní fázi. Konkrétně se hodnotila přesnost retence, rozlišení a tvar špiček při analýze směsi čtyř antibakteriálních látek (amoxicilinu, ampicilinu, penicilinu G a V) v sérii až 90 po sobě následujících injekcí.

Použité instrumentace a metodika

Provedené analýzy využily následující vybavení a parametry:

• Agilent 1290 Infinity II High Speed Pump
• Agilent 1290 Infinity II Multisampler se vzorkovačem a chlazením
• Agilent 1290 Infinity II Multicolumn Thermostat
• Agilent 1290 Infinity II Diode Array Detector
• Kolona ZORBAX Eclipse Plus C18 3 x 100 mm, 1,8 µm
• Software Agilent OpenLAB CDS ChemStation

Chromatografické podmínky:

• Mobilní fáze A: 25 mM KH2PO4 v pH 3,0; B: acetonitril
• Gradient od 5 do 80 procent B v čase 0 až 11 min, celková doba běhu 15 min
• Průtok 1,6 ml/min, teplota kolony 40 °C, objem injekce 3 µl
• Detekce při 204 nm s referenční vlnovou délkou 360 nm

Hlavní výsledky a diskuse

V šesti po sobě jdoucích bězích dosáhla přesnost retence (RSD) pod 0,05 % u všech sloučenin kromě první. Při prodloužené sérii 90 injekcí zůstala RSD pod 0,07 %, rozlišení i symetrie špiček se prakticky nezměnily. Nárůst zpětného tlaku o pouhých 18 bar po 90 bězích potvrzuje, že použitá pumpa a systém odolávají ucpávání i při dlouhodobém kontaktu s fosfátovým pufrem.

Přínosy a praktické využití metody

Robustní výkon Agilent 1290 Infinity II High Speed Pump umožňuje:

• Spolehlivou práci s pufrovou mobilní fází v RP HPLC
• Dlouhodobé sekvenční analýzy bez výrazné ztráty výkonu
• Zvýšenou selektivitu a reprodukovatelnost analýz farmaceutických a biologických vzorků

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj se zaměří na:

• Optimalizaci složení pufrů a jejich koncentrace pro širší rozsah sloučenin
• Automatizované postupy pro proplachování a údržbu systému po analýzách pufrovaných mobilních fází
• Integraci doprovodných detekčních technik a online monitorování stability pH v reálném čase

Závěr

Studie prokázala vysokou stabilitu a spolehlivost Agilent 1290 Infinity II High Speed Pump při použití fosfátového pufru v mobilní fázi. Výsledky potvrzují vhodnost této instrumentace pro náročné a dlouhodobé HPLC aplikace v oblasti farmaceutického výzkumu a kontroly kvality.