Agilent Biocolumns - Amino Acid Analysis - "How-To" Guide

Význam tématu

Aminokyselinová analýza je základní metodou v biochemii a biotechnologiích. Umožňuje kvantitativní i kvalitativní stanovení jednotlivých aminokyselin v proteinech, hydrolyzátech a biologických matricích. Přesná a rychlá analýza je klíčová pro kontrolu kvality biotechnologických produktů, optimalizaci buněčných kultur a vývoj nových bioterapeutik.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem textu je představit kompletní řešení Agilent AdvanceBio Amino Acid Analysis (AAA) pro rychlou, citlivou a reprodukovatelnou separaci aminokyselin s online precolumn derivatizací. Řešení kombinuje LC systém, kolony, reagencie a standardy jednoho výrobce a je určeno pro rozlišení aminokyselin v proteinových vzorcích, buněčných médiích a hydrolyzátech.

Použitá metodika a instrumentace

• LC systém Agilent InfinityLab 1290/1260 Infinity II
• Kolony AdvanceBio AAA 2.7 μm SPP Poroshell, rozměry 4.6 × 100 mm a 3.0 × 100 mm
• Guard kolony pro prodloužení životnosti analytických kolon
• Autosampler G7129A s online derivatizací pomocí OPA a FMOC
• DAD detektor pro simultánní multiwavelength detekci a analýzu spektra
• Fluorescenční detektor pro femtomolovou senzitivitu ve více signálovém režimu
• Mobilní fáze: fosfátový borátový pufr pH 8.2; acetonitril-metanol-voda 45:45:10
• Interní standardy: norvalin a sarcosin

Hlavní výsledky a diskuse

• Separační čas pro 20 aminokyselin pod 20 minut včetně reekvilibrace
• Vysoké rozlišení: rezoluce mezi leucin a isoleucin nad 4.5 (požadavek ≥1.5)
• RSD retence i plochy pod 3 % pro koncentrace 100 pmol i 1000 pmol
• Snížené provozní tlaky díky SPP technologii při zachování 80–90 % účinnosti sub-2 μm částic
• Online derivatizace zajišťuje vyšší reprodukovatelnost a eliminuje více kroků ruční přípravy
• Analýza složení buněčných médií a proteinových hydrolyzátů potvrzuje shodu s teoretickými hodnotami

Přínosy a praktické využití metody

• Kompletní end-to-end řešení šetří čas a minimalizuje potřebu více dodavatelů
• Vysoká propustnost a automatizace umožňují rutinní i výzkumné aplikace v QA/QC a průmyslové analytice
• Stanovení aminokyselin v kultivačních médiích a hydrolyzátech usnadňuje optimalizaci bioprodukce
• Metoda splňuje požadavky Evropské farmakopeje pro systémovou vhodnost
• Flexibilita při výběru detekčního režimu a derivatizačních činidel pro různé úrovně senzitivity

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace s hmotnostní spektrometrií pro zvýšení selektivity a přesnosti kvantifikace
• Další vylepšení povrchových úprav kolon pro odolnost v širokém pH rozsahu
• Minaturizace a microfluidní platformy pro zvýšení throughputu a snížení spotřeby vzorku
• Vývoj nových derivatizačních reagencií s delší životností a vyšší sensitivitu
• Automatizace datové analýzy a propojení s LIMS systémy pro efektivnější správu výsledků

Závěr

Agilent AdvanceBio AAA poskytuje robustní a rychlou metodu pro komplexní analýzu aminokyselin. Kombinace online derivatizace, pokročilé SPP technologie a citlivé detekce zaručuje spolehlivou kontrolu kvality a výzkumné aplikace v biotechnologiích.

Reference

1. European Pharmacopoeia 9.0 2.2.56 Amino Acid Analysis