Evaluating BioAccord System Performance in Late Stage Development and QC Environment – Peptide Mapping Analysis

Význam tématu

Peptidové mapování pomocí LC-MS je klíčovou technikou pro potvrzení primární struktury terapeutických proteinů a kvantifikaci jejich modifikačních forem. V prostředích pozdního vývoje a kontrolní kvality (QC) je nutná vysoká reprodukovatelnost a robustnost metod, aby bylo možné plnit regulační požadavky a zajistit integritu dat bez nutnosti vysoce specializovaných expertů.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo ověřit mezisystémovou i vnitrosystémovou reprodukovatelnost BioAccord™ System pro peptidové mapování v regulovaných pracovních postupech. Pro analýzu byl použit standard tryptického digestu NISTmAb a na třech identických BioAccord systémech bylo provedeno 18 injekcí každého vzorku během přibližně 22 hodin.

Použitá instrumentace

• LC: ACQUITY UPLC I-Class PLUS se sloupcem BEH C18 130 Å, 1,7 µm, 2,1 × 100 mm při 65 °C
• MS detektor: ACQUITY RDa™ (oa-TOF) se zdrojem ESI v pozitivním módu, rozsah m/z 50–2000
• Softwarové prostředí: waters_connect™ pro řízení instrumentu a UNIFI™ Scientific Information System pro automatizovanou akvizici, zpracování a reportování
• Mobilní fáze: 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě (A) a 0,1 % kyseliny mravenčí v acetonitrilu (B), gradient 99 % A→60 % A během 60 min při průtoku 0,2 mL/min

Hlavní výsledky a diskuse

Analýza 18 injekcí na každém ze tří systémů ukázala, že standardní odchylka retenčních časů všech sledovaných peptidů nepřesáhla 0,09 min (5,4 s). Relativní intenzity nativních peptidů a jejich modifikovaných forem (oxidace, deamidace, glykosylace) vykázaly průměrný %RSD do 8,12 % napříč platformami. Tyto hodnoty potvrzují vysokou chromatografickou i hmotnostní reprodukovatelnost vhodnou pro automatizovanou analýzu a porovnávání modifikačních úrovní peptidů.

Přínosy a praktické využití metody

• Splnění požadavků tradiční validace v regulovaných laboratořích QC
• Redukce variability způsobené obsluhou díky plně automatizovaným pracovním postupům
• Možnost rychlého nasazení v late-stage development bez nutnosti složitého doladění metod
• Komplexní reporting peptidového mapování včetně potvrzení PTM a kvantifikace

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření použití BioAccord systému pro široké spektrum atributního monitoringu bioterapeutik, včetně analýzy glykosylace, oligonukleotidů či konjugátů ADC. Vzrůstající integrace se softwarovými platformami umožní ještě vyšší úroveň automatizace QC procesů a napojení na systémy správy laboratorních dat (LIMS). Dále se předpokládá rozvoj metod pro vysoko-průtokové formáty a multi-attributní analýzy.

Závěr

BioAccord System prokázal konzistentní inter- a intra-systémovou reprodukovatelnost pro peptidové mapování, splňující přísné požadavky regulovaných pracovních postupů. Nulová či minimální variabilita retenčních časů a spolehlivé kvantifikace modifikací potvrzují, že platforma je vhodná pro nasazení v late-stage development a QC organizacích.

Reference

1. Shion H. et al. Enabling Routine and Reproducible Intact Mass Analysis When Data Integrity Matters. Waters Application Note, 720006472EN (2019)
2. Ranbaduge N. et al. Routine Peptide Mapping Analysis using the BioAccord System. Waters Tech Brief, 720006466EN (2019)
3. Zhang X. et al. Released N-linked Glycan Analysis Using the BioAccord System. Waters Tech Brief, 720006474EN (2019)
4. Shion H. et al. Molecular Mass Analysis of mAb Chains using the BioAccord System. Waters Tech Brief, 720006529EN (2019)
5. Zhang X. et al. N-linked Glycan Analysis of Biosimilars Using the BioAccord System. Waters Tech Brief, 720006545EN (2019)
6. Shion H. et al. Analysis of Antibody Drug Conjugates by Native MS on the BioAccord System. Waters Tech Brief, 720006570EN (2019)
7. Ranbaduge N. et al. Integrated Peptide Attribute Profiling Workflow. Waters Application Note, 720006602EN (2019)
8. Ippoliti S. et al. Online IEX-MS of mAb Charge Variants Using BioAccord System. Waters Application Note, 720006672EN (2019)
9. Shion H. et al. Evaluating BioAccord LC-MS Performance for Intact Mass Analysis. Waters Tech Brief, 720006722EN (2020)