Multi-residue analysis of 18 regulated mycotoxins by LC-MS/MS (2)

Význam tématu

Fuzarijní mykotoxiny představují významné riziko pro zdraví lidí a zvířat díky své široké kontaminaci potravin a krmiv. Spolehlivá a citlivá multireziduální analýza těchto toxinů je zásadní pro dodržení evropských norem a zajištění bezpečnosti potravin.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout jedinou LC-MS/MS metodu pro kvantifikaci 18 regulovaných mykotoxinů za jedno analytické běhu. Metoda měla splňovat limity stanovené nařízením EC/1881/2006 a umožnit spolehlivou separaci isomerů a rychlou analýzu do 12,5 minuty.

Použitá metodika a instrumentace

Pro extrakci vzorků byly použity validované protokoly od Concept Life Sciences. Kapalinová chromatografie probíhala na systému Nexera X2 s UHPLC čerpadly. Jako detektor sloužil kvadrupólový hmotnostní spektrometr LCMS-8060. Hlavní chromatografickou kolonou byla pentafluorfenylová Mastro PFP o rozměrech 100x2,1 mm a velikosti částic 3 μm. Mobilní fáze obsahovala 0,15 mM roztok fluoridu amonného ve vodě a v metanolu, do metanolové fáze bylo přidáno 2 % octové kyseliny. Kalibrace probíhala za pomoci 13C vnitřních standardů přidávaných při extrakci. Veškeré rozpouštědla byla kvality LCMS od firmy Sigma Aldrich.

Hlavní výsledky a diskuse

Ammonium fluoride významně zvýšil intenzitu signálu mykotoxinů v pozitivním iontovém režimu ve srovnání s běžnými mobilními fázemi. PFP fáze umožnila téměř úplnou baseline separaci dvojic regioizomerů 3-AcDON/15-AcDON a FB2/FB3, což nebylo možné na C18 materiálu. Přesnost retenční doby byla stabilní a opakovatelnost analýzy ve vzorcích mletého koření i pepře vykázala %RSD pod 10 % při dvanáctinásobných opakováních.

Přínosy a praktické využití metody

• Krátký analytický cyklus 12,5 minuty
  
• Možnost jednoho běhu pro 18 mykotoxinů
  
• Vysoká citlivost odpovídající nebo převyšující limity EC
  
• Oddělení důležitých isomerů bez nutnosti vícerunové chromatografie
  
• Vhodné pro rutinní kontrolu kvality v potravinářských a krmivářských laboratořích

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalším směrem je rozšíření metody o nové toxiny a mykotoxinové metabolity, implementace vysokořezolucní hmotnostní spektrometrie pro neznámé kontaminanty a automatizace přípravy vzorku. Vývoj nových dělených fází s ještě lepší selektivitou může dále zkrátit dobu analýzy a zlepšit separaci obtížných isomerů.

Závěr

Navržená LC-MS/MS metoda s použitím fluoridu amonného a PFP fáze poskytuje robustní platformu pro multireziduální testování 18 regulovaných mykotoxinů v potravinách. Významně zlepšuje citlivost, opakovatelnost a separaci klíčových isomerů a splňuje legislativní požadavky EU.

Reference

Uvedená aplikace vychází z dat Shimadzu Application Note C165 a interních validací Concept Life Sciences.