Multi-residue analysis of 18 regulated mycotoxins by LC-MS/MS

Význam tématu

Fusarium mykotoxiny představují závažné riziko pro lidské i zvířecí zdraví zavlečené do potravin a krmiv. Legislativní limity EU stanovují maximální koncentrace řady mykotoxinů, a proto je nezbytná citlivá, přesná a rychlá analytika ke kontrole bezpečnosti potravin.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie bylo vyvinout jednotnou LC-MS/MS metodu pro stanovení 18 regulovaných mykotoxinů v potravinových vzorcích s limity kvantifikace na úrovni nebo pod úrovní nařízením EC 1886/2006. Metoda zahrnuje aflatoxiny B1, B2, G1, G2; fumonisiny B1, B2, B3; ochratoxin A; a trichotheceny včetně acetylderivátů 3-AcDON, 15-AcDON, DON, DAS, FUS-X, HT-2, T-2, NEO, NIV, ZON.

Použitá instrumentace

• UHPLC systém Shimadzu Nexera
• MS detektor Shimadzu LCMS-8060 triple quadrupole
• Analytická kolona Mastro PFP 100×2,1 mm, 3 µm
• Interní standardy C13 značené deriváty mykotoxinů

Použitá metodika

Vzorky byly extrahovány podle validovaného protokolu a obohaceny o interní standardy při extrakci. Mobilní fáze tvořila fáze A 0,15 mM ammonium fluorid a fáze B 0,15 mM ammonium fluorid s 2 % kyseliny octové v methanolu. Gradientní eluce trvala 12,5 minuty při průtoku 0,4 mL/min a teplotě kolony 40 °C. Polarity switching umožnil detekci v pozitivním i negativním módu.

Hlavní výsledky a diskuse

• Použití ammonium fluoridu významně zvýšilo iontový signál v pozitivním módu oproti běžným amonným solím a kyselinám.
• PFP fáze efektivně rozlišila regioizomery 3-AcDON/15-AcDON a FB2/FB3 s téměř bazálním rozlišením, což nebylo možné na C18.
• Metoda dosahuje limity kvantifikace pod legislativními maximy EU a umožňuje rychlý cyklus 12,5 minuty.
• Analýza vzorkových matric (koření, pepř) prokázala opakovatelnost <10% RSD (n=12) pro aflatoxiny a ochratoxin A.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí rychlou a vysoce citlivou analýzu širokého spektra mykotoxinů v potravinách a krmivech. Díky krátkému cyklu, robustní detekci a kvalitnímu rozlišení izomerů je vhodná pro rutinní provoz v QA/QC laboratořích i výzkumu.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření cílených analýz o další toxické metabolity mykotoxinů.
• Integrace s vysokopropustnou robotizovanou extrakcí a automatizovanou datovou analýzou.
• Další optimalizace mobilních fází s fluoridovými přísadami pro zvýšení citlivosti v negativním módu.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda s použitím ammonium fluoridu a PFP kolony efektivně a rychle rozlišuje a kvantifikuje 18 regulovaných mykotoxinů. Splňuje legislativní požadavky EU a je plně vhodná pro rutinní analýzu bezpečnosti potravin.

Reference

1. Baker D, Titman C, Loftus N, Horner J Multi-residue analysis of 18 regulated mycotoxins by LC-MS/MS ASMS 2017 TP-185