Analysis of Sodium Chondroitin Sulfate by ELSD-LT III

Význam tématu

Chondroitin sulfát (SCS) je široce rozšířený mukopolysacharid s významným farmakologickým účinkem na ochranu rohovky a zmírnění kloubních bolestí. Je součástí očních kapek a potravinových doplňků, nicméně jeho stanovení tradičními UV detektory HPLC není možné z důvodu slabé UV absorbance.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a optimalizovat metodu HPLC s detektorem ELSD-LT III pro kvantitativní analýzu SCS v standardních roztocích a komerčních očních kapkách. Výsledky byly porovnány s detekcí refrakčním indexem (RID).

Použitá instrumentace

• HPLC systém: Nexera lite
• Detektor: ELSD-LT III s funkcí Wide (drift tube 100 °C, N₂ 350 kPa)
• Kolona: Imtakt Presto FF-C18 (150×4,6 mm, 2 μm, non-porézní)
• Mobilní fáze: A) voda/triethylamin/ocet. kyselina 100:1,1:0,5 B) acetonitril, gradient 5 % → 55 % (7 min) → 100 % (7,10–9 min) → 5 % (9,10–18 min)
• Tok: 0,35 mL/min, teplota kolony 35 °C, objem injekce 1 μL

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivka na dvojitě logaritmických osách pro koncentrace 250–1000 mg/L vykázala výbornou linearitu (r² > 0,9999). Opakovatelnost (n=6) dosáhla 0,11 % RSD pro retenci a 2,08 % RSD pro plochu piku. Analýza desetkrát naředěných očních kapek přinesla koncentraci 629,4 mg/L SCS. S použitím RID nebyla možná gradientní eluce, což omezilo separaci ostatních složek vzorku.

Přínosy a praktické využití metody

• Umožnění gradientní eluce snižuje dobu analýzy a zlepšuje separaci složek.
• ELSD detektor je univerzální pro nevolatilní látky bez potřeby UV absorbance.
• Funkce Wide automaticky upravuje citlivost pro různé koncentrace ve stejném metodickém souboru.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj ELSD detektorů s nižší detekční mezí a širší kompatibilitou pro kombinaci s LC-MS. Metodika může být adaptována na analýzu dalších mukopolysacharidů či komplexních biologických matric a pro automatizované vysokopropustné analýzy.

Závěr

HPLC metoda s detekcí ELSD-LT III pro chondroitin sulfát prokázala vysokou přesnost, výbornou linearitu a opakovatelnost, přičemž gradientní eluce výrazně zkracuje dobu analýzy a zlepšuje separaci ve srovnání s RID detekcí.

Reference

• Shimadzu Application News No. L567, Shimadzu Corporation, 2020