LC-MS/MS Analysis of EtG and EtS in Dilute Urine on the TSQ Endura Triple Quadrupole MS

Význam tématu

Etylglukuronid (EtG) a etylsulfát (EtS) jsou klíčovými dlouhodobými biomarkery konzumace alkoholu. Na rozdíl od samotného ethanolu, který se v organismu rychle odbourává, tyto metabolity přetrvávají v moči výrazně déle, což umožňuje spolehlivou detekci minulého požití alkoholu ve forenzních a klinických aplikacích.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout rychlou, citlivou a selektivní metodu HPLC-MS/MS pro stanovení EtG a EtS v naředěných vzorcích moči bez nutnosti složité extrakce. Metoda měla dosahovat kvantifikačních limitů 100 ng/mL pro EtG a 50 ng/mL pro EtS a současně zachovat široký lineární rozsah až do 50 000 ng/mL.

Použitá instrumentace

• Kapalinová chromatografie: Thermo Scientific Dionex UltiMate 3000 RSLC s OAS autosamplerem.
• Analytický sloupec: Thermo Scientific Hypersil GOLD, 50 × 3 mm, 5 μm.
• Mobilní fáze: 5 mM dihexylammoniumacetátu (iontové párování) ve vodě (A) a acetonitril (B), gradient 5 minut, průtok 1 mL/min.
• Hmotnostní spektrometrie: Thermo Scientific TSQ Endura triple kvadrupól s Ion Max NG zdrojem a HESI-III ionizací.
• Software pro akvizici a vyhodnocení dat: Thermo Scientific TraceFinder.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala:

• Lineární odezvu pro EtG v rozsahu 50–50 000 ng/mL a EtS v rozsahu 25–50 000 ng/mL.
• Kvantifikační limity 50 ng/mL pro EtG a 25 ng/mL pro EtS s přesností a přesností do 12 % RSD.
• Dobré tvary chromatografických píků díky iontovému párování, které přesunulo anality mimo frontu rozpouštědla a snížilo matricové interferenční efekty.
• Stabilní vnitřní standardy (deuterované izotopy) v 23 různých šaržích moči s konzistentní obnovou.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlé (5minutové) vyšetření EtG a EtS s minimální přípravou vzorku pouhým naředěním, čímž šetří čas i náklady laboratoře. Je vhodná pro forenzní toxikologii, kontrolu dodržování abstinence i klinickou diagnostiku.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj se může soustředit na:

• Integraci nových biomarkerů alkoholu a jejich multiplexní stanovení.
• Zkrácení doby analýzy pomocí ultrarychlých LC metod nebo mikroflow režimů.
• Automatizaci přípravy vzorku a datové analýzy v rámci laboratorních informačních systémů.

Závěr

Vyvinutá HPLC-MS/MS metoda pro stanovení EtG a EtS v naředěné moči nabízí vynikající citlivost, rychlost a reprodukovatelnost. Je robustní, snadno implementovatelná a splňuje požadavky forenzní toxikologie i klinické praxe.