Quantification of total homocysteine in human plasma or serum by liquid chromatography tandem mass spectrometry for clinical research

Význam tématu

Homocystein je klíčový biomarker v klinickém výzkumu zaměřeném na kardiovaskulární onemocnění a neurologické poruchy. Jeho správné stanovení v lidské plazmě či séru umožňuje vyhodnocení rizika a sledování účinnosti terapeutických intervencí.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo implementovat a validovat rychlou a citlivou LC-MS/MS metodu pro kvantifikaci celkové homocysteinu na instrumentaci Thermo Scientific Transcend II TLX-1 ve spojení s TSQ Endura triple kvadrupolem. Využita byla redukce všech forem homocysteinu do volné formy během přípravy vzorku.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek 50 µL plazmy nebo séra byl smíchán s redukčním roztokem a interním standardem (d8-homocystin), inkubován 5 minut, následně vyčistěn precipitací proteinů a po odstředění injikován. Chromatografie probíhala izokraticky, doba stanovení 70 sekund. Detekce byla provedena v pozitivním módu HESI SRM metodou na TSQ Endura. Data zpracováno pomocí TraceFinder 3.3.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární rozsah 0,117 až 50,7 µmol/L s korelačním koeficientem R2 0,991. Limit kvantifikace byl stanoven na 0,117 µmol/L. Analytická přesnost se pohybovala v rozmezí bias 3,7–5,2 % pro tři úrovně kontrol. Intra-asay precize dosáhla maximálně 2,0 % CV a inter-asay precize maximálně 3,3 % CV.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá příprava vzorku s jednoduchou redukcí a precipitací proteinů.
• Kratší doba analýzy ve srovnání s tradičními metodami (70 s na vzorek).
• Vysoká citlivost a spolehlivost vhodná pro klinický výzkum.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možné rozšíření metody o multiplexní kvantifikaci dalších thiolů v plazmě či séru. Integrace s vysoce výkonnými hyphenovanými systémy pro zvýšení throughput a potenciální automatizace celé přípravy vzorků.

Závěr

Validovaná LC-MS/MS metoda na platformě Transcend II TLX-1/TSQ Endura splňuje požadavky klinického výzkumu na měření celkového homocysteinu v lidské plazmě či séru. Metoda se vyznačuje vysokou přesností, precizností a krátkým časem analýzy.

Použitá instrumentace

• LC systém Thermo Scientific Transcend II TLX-1
• Mass spektrometr Thermo Scientific TSQ Endura triple kvadrupol
• Heated electrospray ionizace v pozitivním módu
• Software Thermo Scientific TraceFinder 3.3
• Analytická kolona a mobilní fáze od RECIPE Chemicals + Instruments