Offline and online sample extraction for the quantification of tricyclic antidepressants in human plasma or serum for clinical research

Význam tématu

Quantifikace tricyklických antidepresiv v lidské plazmě nebo séru je klíčová pro terapeutický monitoring a farmakokinetické studie. Přesná a citlivá analýza těchto látek umožňuje optimalizaci léčby a zajištění bezpečnosti pacientů.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout robustní LC MS/MS metodu pro současné stanovení 12 tricyklických antidepresiv v lidské plazmě nebo séru s využitím systému Thermo Scientific Transcend II TLX-1 v kombinaci s TSQ Endura triple kvadrupolem.

Použitá metodika

Byly porovnány dva přístupy:

• Online extrakce s přímou injekcí neextrahovaného vzorku a automatickým přidáním deuterovaných interních standardů na SPE kartáči.
• Offline precipitace bílkovin přidáním precipitantu s interními standardy pro zvýšení citlivosti, následnou centrifugací a analýzou supernatantu.

Chromatografické dělení zajišťovala SPE kolona a analytický column od RECIPE s celkovou dobou běhu 5,0 min pro online a 2,9 min pro offline přístup. Detekce probíhala selektivně reakcí monitoringu (SRM) v pozitivním ionizačním režimu s dvěma přechody na analyt pro kvantifikaci a potvrzení.

Použitá instrumentace

• LC systém Thermo Scientific Transcend II TLX-1
• Triple kvadrupolový MS TSQ Endura se zahřívanou elektrosprejovou ionizací
• RECIPE SPE kartáč a analytický column
• Kalibrátory a kontrolní vzorky RECIPE ClinMass
• Deuterované interní standardy pro každé antidepresivum
• Software Thermo Scientific TraceFinder 3.3

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární odezvu v rozsahu dovolujícím stanovení koncentrací od cca 2 ng/ml (direct injection) a od cca 0,9 ng/ml (offline). Hodnoty biasu měřené vůči nominálním koncentracím se pohybovaly mezi -7,2 % až 17,1 % pro přímou injekci a -7,6 % až 9,2 % pro offline preparaci. Intraassay přesnost (%CV) byla pod 7,2 % a interassay pod 9,4 % pro všechny analyty.

Přínosy a praktické využití metody

• Simultánní kvantifikace 12 tricyklických antidepresiv v jednom běhu
• Možnost volby mezi vysokou propustností bez extrakce a citlivým offline přístupem
• Robustní výsledky vhodné pro klinický výzkum a terapeutický monitoring

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může zahrnovat plnou automatizaci preparativní fáze, miniaturizaci spotřebního materiálu, rozšíření panelu o nové psychoaktivní látky, integraci s LIMS a využití umělé inteligence pro pokročilou analýzu dat.

Závěr

Vyvinutá LC MS/MS metoda nabízí flexibilní a validovaný postup pro stanovení tricyklických antidepresiv v lidské plazmě či séru s vysokou citlivostí, přesností a reprodukovatelností vhodnou pro klinickou praxi.

Reference

• Claudio De Nardi, Katharina Kern, Steffen Peters. Offline and online sample extraction for the quantification of tricyclic antidepressants in human plasma or serum for clinical research. Technical Note 64914. Thermo Fisher Scientific, 2017.