Quantification of 15 tricyclic antidepressants in human plasma or serum by LC-HRAM-MS for clinical research

Význam tématu

Tricyklická antidepresiva (TCA) patří mezi klíčové léčiva používaná k léčbě deprese, úzkostných stavů a neuropatické bolesti. Přestože mají potenciál závažných vedlejších účinků, zůstávají v klinické praxi ceněná pro svoji účinnost. Monitoring sérových koncentrací TCA významně přispívá ke zlepšení terapeutické kontroly, odhalení nedodržování režimu, předcházení toxicitě a vyhodnocení lékových interakcí.

Cíle a přehled studie / článku

Hlavním cílem bylo vytvořit a validovat kvantitativní metodu pro stanovení 15 tricyklických antidepresiv v lidské plazmě a séru pomocí chromatografie UHPLC spojené s vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrií (LC-HRAM-MS) na přístroji Orbitrap Exploris 120. Studie demonstruje výkonnost HRAM detekce pro rutinní terapeutický monitoring TCA.

Použitá metodika

Offline příprava vzorku probíhala vkladem deuterovaných interních standardů a srážením bílkovin: vzorek 50 µl plazmy nebo séra byl rekonstituován 100 µl srážecího činidla obsahujícího interní standardy, promíchán, odstředěn a supernatant byl injikován do UHPLC.
Chromatografie byla realizována na systému Vanquish Flex Binary UHPLC s analytickou kolonou RECIPE, gradientní eluce o délce 4 minut, mobilní fáze A/B a konstantní průtok 0,8 ml/min.
Detekce se prováděla na Orbitrap Exploris 120 vybaveném H-ESI zdrojem v kladném režimu. Pro většinu analytů byl použit režim FullMS-ddMS2, u izobarických párů normaprotilin/protriptylin režim tMS2 s daty ze seznamu hmot.

Použitá instrumentace

• Thermo Scientific Vanquish Flex Binary UHPLC
• Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 MS s H-ESI zdrojem
• TraceFinder 5.1 software pro zpracování dat
• ClinMass® TDM Platform a ClinMass Add-On Set pro tricyklická antidepresiva (RECIPE Chemicals + Instruments)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární odezvu s vážením 1/x napříč kalibračními úrovněmi a nízkými mezerami kvantifikace (LLOQ od 0,68 do 18,3 µg/l). Bias mezi nominální a vypočtenou koncentrací byl v rozsahu ±15 % (±20 % u LLOQ). Přesnost (%CV) byla vždy pod 7,1 % v rámci jednoho běhu a pod 4,2 % mezi běhy. Nebyl pozorován žádný carryover. Chromatogramy na úrovni LLOQ pro klíčové analyty potvrdily selektivitu a citlivost metody.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou přesnost, selektivitu a reprodukovatelnost, což ji činí vhodnou pro výzkumné laboratoře zabývající se terapeutickým monitoringem, farmakokinetickými studiemi a studiemi compliance. Jednoduchá příprava vzorku šetří čas a snižuje riziko chyb při zpracování.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může směřovat k automatizaci přípravy vzorků, integraci s laboratorními informačními systémy a rozšíření panelu analyzovaných látek o metabolity a další psychoaktivní sloučeniny. Vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie může rovněž podpořit nekonvenční biochemické studie a personalizovanou medicínu.

Závěr

Vyvinutá LC-HRAM-MS metoda na Orbitrap Exploris 120 spojuje rychlou přípravu vzorku, vysokou citlivost a selektivitu pro kvantifikaci 15 tricyklických antidepresiv v plazmě či séru. Splňuje nároky klinického výzkumu na linearitu, přesnost a reprodukovatelnost a představuje spolehlivý nástroj pro terapeutický monitoring.