vMethod™ Application for Food Testing

Význam tématu

Nelegální příměsi nevhodných druhů masa (např. koniny v hovězím) představují zdravotní, etické a náboženské riziko. Regulátoři stanovili kritický práh 1 % (w/w) pro nedeklarované druhy masa, což vyžaduje vývoj citlivých a specifických analytických metod.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo navrhnout vysoce selektivní a robustní LC-MS/MS metodu umožňující současnou detekci a speciační screening šesti druhů masa (vepřové, hovězí, jehněčí, kuřecí, kachní, koňské) na systému SCIEX QTRAP 4500 v jediné injekci. Metoda má fungovat pro syrové i tepelně upravené a průmyslově zpracované vzorky.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: 10 g masa homogenizováno, defatizováno, extrahováno a zredukováno, alkylováno, následovala tryptická digesce (4–12 h) a SPE očista (Cleanert PEP kartáše).
• LC: ExionLC AC s kolonkou Phenomenex Kinetex C18 (2,6 µm, 100×4,6 mm), gradient 15 min (0,1 % FA voda vs. acetonitril), průtok 500 µL/min.
• MS/MS: SCIEX QTRAP 4500, Turbo V ESI+, teplota 650 °C, Scheduled MRM pro cílenou multiplexní detekci.
• Výběr signálních peptidů: databázové vyhledávání v ProteinPilot™, kontrola v Skyline a NCBI BLAST pro zajištění unikátnosti.

Hlavní výsledky a diskuse

• Identifikováno 24 markerových peptidů (4 proteiny, 2 peptidy na protein, 2 fragmenty na peptid) pro šest druhů masa.
• Detekční limit 1 % (w/w) ve směsi masa; lineární odezva 0–100 % (r2 > 0,99) pro všechny sledované signály.
• Markerové peptidy odolné vůči tepelné úpravě; bez poklesu citlivosti v syrových i smažených vzorcích.
• Verifikace na komerčních potravinách (včetně halal certifikovaných) potvrdila selektivitu a spolehlivost metody.

Přínosy a praktické využití

• Vysoká specifičnost a citlivost nad rámec PCR a ELISA, nezávislost na integritě DNA či protilátek.
• Multiplexní screening šesti druhů masa v jediné analýze zkracuje čas a náklady.
• Aplikovatelné pro kontrolu kvality, autentizaci potravinářských výrobků a splnění regulačních požadavků.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metodiky o další druhy masa nebo alergenů s využitím signálních peptidů.
• Automatizace datové analýzy a integrace kvantitativních standardů pro absolutní kvantifikaci.
• Uplatnění ve forenzní chemii, certifikaci potravin a monitorování dodavatelských řetězců.

Závěr

Navržená LC-MS/MS metoda na SCIEX QTRAP 4500 nabízí rychlý, spolehlivý a multiplexní screening šesti běžných druhů masa s detekčním limitem 1 % (w/w). Metoda je vhodná pro syrové i průmyslově zpracované vzorky a podporuje potravinářský průmysl i kontrolní orgány ve zajištění autenticity a bezpečnosti potravin.

Reference

1. Department for Environment Food & Rural Affairs (Defra) 2013: processed beef products and horse meat – limit 1 % undeclared species.
2. Food Safety Authority (FSA) 2014: guidelines for contamination thresholds in processed meat products.