Native State Charge Variant Analysis of Commercialized Monoclonal Antibodies in Minutes

Význam tématu

Monitoring nabitých variant monoklonálních protilátek je klíčový pro sledování post-translačních modifikací a stability bioterapeutik. Rychlá a spolehlivá analýza v nativním stavu urychluje vývoj a zkracuje časovou osu uvádění léčiv na trh.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo demonstrovat minimalizaci doby vývoje metody pro separaci nabitých variant komerčně dostupných monoklonálních protilátek pomocí CZE Rapid Charge Variant Analysis Kit na přístroji PA 800 Plus. Studie hodnotí rozlišení, citlivost, reprodukovatelnost a rychlost analýzy Herceptin, Remicade a Rituxan.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda je založena na kapilární zónové elektroforéze v nativním stavu s univerzálním pufrem. Vzorky protilátek jsou naředěny na koncentraci 1 mg/ml v CE Grade vodě, injekce probíhá tlakem 0,5 PSI po dobu 10 sekund, separace při elektrickém poli 1000 V/cm.

• Instrumentace: PA 800 Plus Pharmaceutical Analysis System s UV detekcí a filtrem 214 nm
• Kapilára: předmontovaný kazetový systém P/N A55625
• Reagencie: CZE Rapid Charge Variant Analysis Kit P/N C44790
• Software: 32 Karat verze 10

Hlavní výsledky a diskuse

Analýza deseti opakovaných injekcí každé protilátky ukázala vysokou reprodukovatelnost s RSD pod 2 % pro procentuální podíl kyselých, hlavního a bazických variant. Doba analýzy je nižší než 5 minut na vzorek s meziinjekční dobou doplňování pufru 2 minuty. Metoda poskytuje jasná a stabilní profily nabitých variant bez nutnosti rozsáhlé optimalizace.

Přínosy a praktické využití metody

• Minimální čas vývoje metody díky omezenému počtu optimalizačních parametrů
• Aplikovatelné na široké spektrum monoklonálních protilátek a terapeutických proteinů s různým pI nad 7
• Vysoká propustnost vhodná pro výzkum, vývoj i rutinní QC
• Indikativní pro stabilitu v nativním stavu, kompatibilní s platformními řešeními

Budoucí trendy a možnosti využití

Budoucí vývoj se zaměří na automatizaci, integraci s hyphenovanými technikami a rozšíření pro analýzu konjugátů jako ADC. Další optimalizace mohou zahrnovat úpravu délky kapiláry, teploty, pH pufru a koncentrace aditiv.

Závěr

CZE Rapid Charge Variant Analysis Kit pro PA 800 Plus představuje rychlou, robustní a reprodukovatelnou metodu pro analýzu nabitých variant monoklonálních protilátek v nativním stavu. Metoda výrazně zkracuje dobu vývoje a zefektivňuje rutinní kontrolu kvality.

Reference

1. He Y., Isele C., Hou W., Ruesch M. J. Sep. Sci. 2011, 34, 548–555.
2. Moritz B., Schnaible V., Kiessig S. et al. J. Chromatogr. B 2015, 983–984, 101–110.
3. Moritz B., Locatelli V., Niess M. et al. Electrophoresis 2017, 38, 3136–3146.