Automating Metabolic Stability Assays and Analyses using a Robotic Autosampler and LC/MS/MS Platform

Význam tématu

Metabolická stabilita in vitro pomocí jaterních mikrozomů je zásadní pro predikci clearance léčiv v raných fázích vývoje. Zrychlení a automatizace těchto testů významně zvyšuje kapacitu DMPK laboratoří a zkracuje dobu identifikace kandidátních sloučenin.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo ukázat plně automatizované provedení mikrozomálních testů stability sloučenin a jejich následnou analýzu pomocí LC-MS/MS. Studie demonstrovala spárování GERSTEL MPS robotického autosampleru s Agilent Ultivo triple kvadrupólovým hmotnostním spektrometrem.

Použitá metodika a instrumentace

Testy sledovaly úbytek mateřské látky v časových bodech (0–60 min) v přítomnosti myších a potkaních mikrozomů za použití regenerujícího systému NADPH.

• Robotika: GERSTEL MPS roboticPRO s CF-200 centrifugou a vyhřívaným agitátorem.
• Chromatografie: Agilent 1260 HPLC s Poroshell 120 EC-C18 (3×50 mm, 2,7 μm).
• Hmotová analýza: Agilent Ultivo Triple Quadrupole MS, ESI pozitivní mód.
• Příprava vzorků: automatické ředění, časově řízené odběry, přidání studeného acetonitrilu a interních standardů.

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky dosáhly koeficientu determinace R2 ≥ 0,99 pro všechny analyty. Validace metody pro QC úrovně prokázala průměrnou přesnost 95,6 % (rozsah 73,8–113 %) a průměrnou precizi 2,78 % RSD (rozsah 1,48–5,29 %). Časové průběhy stability v myších i potkaních mikrozomech potvrdily opakovatelnost a robustnost systému.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizace přináší:

• Vyšší průtok vzorků (high throughput).
• Eliminaci ručních chyb a zajištění reprodukovatelnosti.
• Zrychlení DMPK workflow a úsporu pracovních kapacit.

Budoucí trendy a možnosti využití

Automatizované platformy lze rozšířit o:

• Pokročilé datové zpracování a online vyhodnocení kinetických parametrů.
• Integraci s dalšími in vitro modely (např. hepatocytární testy).
• Moduly pro automatizované preparativní kroky či derivatizaci.

Závěr

Studie potvrdila, že plně automatizovaný protokol mikrozomálních testů stability může být efektivně realizován pomocí GERSTEL MPS a LC-MS/MS. Metoda dosahuje vysoké přesnosti, precize a throughputu potřebného pro moderní farmaceutický vývoj.

Reference

[1] Corning Discovery Labware Inc. Mammalian Liver Microsomes, Guidelines for Use, TF000017 Rev. 2.0, 2019.