Analysis of Macrolide Antibiotics in Bovine Muscle Tissue Using Liquid Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

Význam tématu

Macrolidová antibiotika a lincosamidy se široce využívají ve veterinární medicíně pro léčbu respiračních onemocnění hospodářských zvířat a jako aditiva ve krmivech. Nesprávné použití či nedodržení zákonných dob odmlčení může vést k reziduím antibiotik v mase, ohrožujícím citlivé spotřebitele. Cílem je zajistit rychlou, citlivou a spolehlivou kontrolu reziduí pro ochranu zdraví a plnění legislativních limitů (MRL).

Cíle a přehled studie

Studie popisuje validaci multireziduální metody pro simultánní kvantifikaci 18 makrolidových veterinárních antibiotik v hovězím svalstvu. Primárním cílem bylo ověřit linearitu, specificitu, přesnost, opakovatelnost, mezní schopnosti (CCα, CCβ) a prokázat splnění požadavků směrnice 2002/657/EC.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek 5 g homogenizovaného hovězího masa se extrahoval 0,1 M Tris pufrem, přidáním interních standardů a vícenásobnou extrakcí. Po centrifugaci následovalo čištění na Oasis PRiME HLB SPE kolonce (kondice: MeOH, H2O, Tris), promytí 5% MeOH a hexanem, eluace amoniakovým metanolovým roztokem, vysušení a reconstituce v 80/20 H2O/AcN.
Separační podmínky UPLC:

• Kolonka ACQUITY HSS T3 (2.1×100 mm), 50 °C
• Mobilní fáze A: voda + 0.1% HCOOH, B: ACN + 0.1% HCOOH
• Gradient 11 min, průtok 0,4 mL/min, objem injekce 1 µL

Detekce MS/MS:

• Xevo TQ-S micro, ESI+, zdroj 150 °C, desolvační 500 °C
• MRM režim s automatickým nastavením dwell time
• Software: MassLynx a TargetLynx XS

Použitá instrumentace

• ACQUITY UPLC I-Class PLUS s FTN Sample Manager
• Xevo TQ-S micro tandemový kvadrupólový MS
• Oasis PRiME HLB SPE kartridže
• ACQUITY HSS T3 kolonka
• MassLynx a TargetLynx XS software

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda zajistila dobré retence a tvar píků (1,9–7,3 min), lineární kalibrační křivky (R2 > 0,99), specifitu bez rušivých signálů a iontové poměry v legislativních tolerancích. Nízké hladiny detekce umožnily spolehlivou identifikaci pod MRL. Průměrné recovery byly 81–111 %, RSDr < 12 %, RSDRL < 12 %. Hodnoty CCα a CCβ odpovídaly požadavkům na screeningové metody.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlé multireziduální screenování makrolidů v hovězím mase, minimalizuje spotřebu organických rozpouštědel a zkracuje dobu analýzy na 11 min. Robustní extrakce a čištění zajišťují nízké matriční interference a dlouhodobou stabilitu systému. Vhodné pro rutinní kontrolu dodržování MRL i interní analýzy v potravinářských provozech.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může zahrnovat:

• Rozšíření na jiné živočišné matrice (ryby, mléko).
• Automatizaci přípravy vzorků a vysokoprůtokové UPLC–MS/MS platformy.
• Využití vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie pro nekalibrované screeningové metody.
• Integraci sledování antibiotické rezistence do monitorovacích plánů.

Závěr

Validovaná metoda prokazuje vysokou citlivost, spolehlivost a flexibilitu pro multireziduální analýzu makrolidových antibiotik v hovězím svalstvu podle evropské legislativy. Lze ji adaptovat na další matice a rozšiřovat o nové analytické technologie k posílení bezpečnosti potravin.

Reference

1. Regulation (EU) 2019/6 of the European Parliament and of the Council of 11 December 2018 on veterinary medicinal products and repealing Directive 2001/82/EC. OJ L 4, 7.1.2019, 43–167.
2. Commission Regulation (EU) No 37/2010 of 22 December 2009 on pharmacologically active substances and their classification regarding maximum residue limits in foodstuffs of animal origin. OJ L 15, 20.1.2010, 1–72.
3. 21 C.F.R. § 556.292 (2018).
4. WHO (2017). WHO guidelines on use of medically important antimicrobials in food-producing animals. Geneva, World Health Organization.
5. 2002/657/EC: Commission Decision of 12 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results. OJ L 221, 17.8.2002, 8–36.