Automated Online Multi-Residue LC-MS/MS Method for the Determination of Antibiotics in Chicken Meat

Význam tématu

Antibiotika jsou nezbytná pro veterinární léčbu a prevenci nemocí, avšak jejich nadměrné použití může vést k reziduím v potravinách živočišného původu. Pro zajištění bezpečnosti potravin stanovuje EU přísné limity maximálních residuí (MRL). S rostoucím počtem vzorků je kritické vyvíjet rychlé, citlivé a spolehlivé multi-reziduální metody.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vytvořit a validovat online multi-reziduální kvantitativní metodu pro stanovení 36 antibiotik ze 7 tříd (aminoglykosidy, sulfonamidy, makrolidy, kinolony, tetracykliny, linkosamidy a trimethoprim) v mase kuřat. Metoda využívá systém Transcend TLX s technologií TurboFlow pro automatizované čištění vzorku a LC-MS/MS pro separaci a detekci.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek kuřecího masa se homogenizuje, extrahuje směsí acetonitrilu a 2% trichloroctové kyseliny, centrifuguje a filtruje. Online čištění probíhá na sloupci TurboFlow Cyclone P, analyty jsou pak přeneseny na analytický sloupec BetaSil Phenyl/Hexyl (50×2,1 mm, 3 µm). Separace probíhá gradientem vodných a organických fází (HCOOH, heptafluorbutyrát) během 19 minut. Detekce je realizována HESI v pozitivním iontovém režimu na tandemovém kvadrupólu TSQ Quantum Access MAX ve SRM režimu.

Použitá instrumentace

• Thermo Scientific Transcend TLX-1 s TurboFlow Cyclone P sloupcem
• Thermo Scientific BetaSil Phenyl/Hexyl (50×2,1 mm, 3 µm)
• Thermo Scientific TSQ Quantum Access MAX triple quadrupole MS
• Termostatovaný PAL autosampler, vortex, centrifuga

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda byla validována podle rozhodnutí EU 2002/657/EC. Linearity kalibrace dosahovaly korelačních koeficientů >0,99 na rozsahu 0–400 µg/kg. Přesnost (RSD) se pohybovala mezi 3–27 %, obnovitelnost mezi 71–120 %. Limity detekce (LOD) byly 0,3–40 µg/kg a limity kvantifikace (LOQ) 1–120 µg/kg, vždy pod odpovídajícími MRL. CCα a CCβ stanovené dle ISO 11843 rovněž potvrzují spolehlivost metody.

Přínosy a praktické využití metody

Online čištění TurboFlow výrazně zkracuje přípravu vzorku, snižuje znečištění MS a nutnost údržby. Jednoduchá extrakce a jediná analytická run umožňují zpracování až ~40 vzorků kuřecího masa denně. Metoda splňuje legislativní požadavky a je vhodná pro rutinní kontrolu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozšíření může zahrnovat nové třídy antibiotik a zrychlené protokoly s menšími objemy vzorku. Integrace s vysokorozlišovací MS umožní širší screening bez předem definovaných analyz. Využití miniaturizovaných a mikrofluidních platforem povede k dalšímu zvýšení propustnosti a snížení spotřeby reagencií.

Závěr

Navržená a validovaná metoda kombinuje online TurboFlow čištění s LC-MS/MS detekcí, poskytuje rychlý, citlivý a robustní přístup pro kvantifikaci 36 antibiotik v kuřecím mase. Splňuje požadavky EU na přesnost, přesnost a selektivitu, a je doporučena pro rutinní monitorování reziduí.

Reference

• European Commission. Council Regulation (EEC) No. 2377/90 of 26 June 1990.
• Martos P.A.; Jayasundara F.; Dolbeer F.; et al. J. Agric. Food Chem. 2010, 58, 5932–5944.
• Bousova K.; Mittendorf K. Multi-residue automated Turbulent Flow™ on-line LC-MS/MS method for determination of antibiotics in milk; Thermo Fisher Scientific, 2012.
• European Commission Decision 2002/657/EC. Off. J. Eur. Commun. L221, 2002.
• ISO 11843: Capability of detection, 1997.