Quantitative Analysis of Oxytocin in Rat Plasma Using LC/MS/MS

Význam tématu

Oxytocin je klíčový peptidový hormon zodpovědný za stimulaci kontrakcí děložních svalů během porodu a navíc sehrává zásadní roli v sociálních vazbách mezi matkou a potomkem, rodinou či partnery. Jeho přesné stanovení v biologických vzorcích je klíčové pro farmakologické a behaviorální studie.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie bylo vyvinout citlivou a reprodukovatelnou metodu pro kvantitativní analýzu oxytocinu v potkaní plazmě za použití triplekvadrupólového LC-MS/MS systému Shimadzu LCMS-8050.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plazmy potkanů (SLC Wistar) byly ošetřeny heparinem a podrobeny precipitaci proteinů acetonitrilem (10:1), následovány centrifugací a koncentrací supernatantu. Separace proběhla na kolonce Shim-pack GISS-HP (2.1×50 mm, 3 µm) v systému Nexera X2 s gradientem vody a methanolu při 0,3 mL/min a 40 °C. Detekce probíhala pomocí ESI v negativním módu s MRM přechodem m/z 1005.4→939.4 a optimalizovanými parametry plynů a teplot (DL 150 °C, block 500 °C, interface 350 °C).

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivka pokrývající koncentrace 0.1–500 ng/mL vykázala vynikající linearitu (r2 >0.999) a dobrou přesnost (RSD 8.3 %). Citlivost metody umožnila detekovat oxytocin již v 0.23 ng/mL v neobohacené plazmě. Recovery test při namáčknutí 2 ng/mL prokázal průměrnou návratnost 91 %.

Přínosy a praktické využití metody

Tato metoda nabízí vysokou selektivitu, citlivost a reprodukovatelnost, což ji předurčuje pro farmakokinetické studie, behaviorální výzkum i kontrolu kvality farmaceutických přípravků obsahujících peptidové hormony.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření na multiplexní stanovení dalších peptidů, automatizace přípravy vzorků a aplikace v klinickém monitoringu biologických markerů stresu a sociálních interakcí.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda poskytuje robustní a citlivý nástroj pro kvantifikaci oxytocinu v potkaní plazmě, splňující kritéria linearity, preciznosti a recovery, s potenciálem širokého využití ve výzkumných i průmyslových aplikacích.

Reference

1. Takahashi T., Inohana Y. Quantitative Analysis of Oxytocin in Rat Plasma using LC/MS/MS. Shimadzu Application Note C211, May 2020.