Agilent Bond Elut Lipid Extraction - Method guide for 96-well plate

Význam tématu

Extrakce lipidů z biologických vzorků je klíčová pro biochemický výzkum, klinickou diagnostiku a průmyslovou analytiku. Spolehlivá separace a koncentrování lipidů umožňuje přesnou kvantifikaci a charakterizaci pomocí hmotnostní spektrometrie či chromatografie, což usnadňuje studium metabolických drah, biomarkerů a toxikologie.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem textu je představit protokol Agilent Bond Elut Lipid Extraction ve formátu 96-jamkové destičky pro vysokoprůtokovou extrakci lipidů. Metoda využívá patentovanou EMR-Lipid sorbent chemii, která selektivně zachycuje lipidické sloučeniny a zjednodušuje postup ve srovnání s tradičními extrakcemi kapalina–kapalina.

Použitá metodika a instrumentace

Postup sestává z následujících fází:

• Proteinová precipitace: Přidání ACN s 5 % MeOH v poměru 9:1 ke vzorku (např. 100 µl plazmy + 900 µl srážecího činidla), sonikace na ledu 10 min.
• Naložení: Přesun celého homogenátu na SPE destičku Bond Elut Lipid Extraction.
• Praní: Dvakrát 1 ml směsi ACN/voda (9:1) k odstranění nečistot.
• Eluce: Použití DCM/MeOH (1:2 v/v) nebo CHCl₃/MeOH (1:1 v/v) k získání lipidů (min. 50 % MeOH pro uvolnění lipidů).
• Sušení: Odpaření eluátu za N₂ při 30 °C, následuje rekonstituce do 100 µl n-BuOH/MeOH (1:1 v/v).

Hlavní přístroje a pomůcky:

• Bond Elut Lipid Extraction 96-well plate
• Multikanálová pipeta nebo automatizovaný liquid handler
• Vakuu­mový/pozitivní tlakový manifold nebo gravitační tok
• Nitrogenový evaporátor a ohřevný modul
• Sonikátor a centrifuga
• Chemicky odolná sběrná destička (sklo, křemíkem pokovený PP)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda poskytuje porovnatelné výtěžky lipidů s klasickými kapalin–kapalin extrakcemi a lepší reprodukovatelnost díky eliminaci složitých fázových přechodů. Extrakce v 96-jamkovém formátu zkracuje čas přípravy až o 50 % a umožňuje snadnou automatizaci. EMR-Lipid sorbent účinně zadržuje široké spektrum lipidů, zatímco nepolární a proteinové nečistoty jsou efektivně odplaveny.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda je vhodná pro vysokoprůchodovou přípravu vzorků plazmy, buněčných kultur a tkání před hmotnostní spektrometrií či GC/LC analýzou lipidů. Umožňuje rychlé zpracování desítek až stovek vzorků za den a snižuje riziko křížové kontaminace.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace do plně automatizovaných pracovních stanic a robotických platforem.
• Vývoj miniaturizovaných destiček a mikrofluidických systémů pro snížení spotřeby vzorku a činidel.
• Kombinace s on-line spojkou SPE–LC–MS pro plně nepřetržitou analýzu lipidomiky.
• Využití umělé inteligence pro optimalizaci parametrů extrakce a predikci výtěžků.

Závěr

Protokol Agilent Bond Elut Lipid Extraction 96-well nabízí robustní, rychlou a reprodukovatelnou metodu extrakce lipidů pro široké spektrum biologických vzorků. Díky využití EMR-Lipid sorbentu a optimalizovaným krokům precipitace, praní a eluce je dosaženo vysoké čistoty a výtěžnosti lipidů, což usnadňuje následnou analýzu.

Reference

• Agilent Technologies, Inc. Bond Elut Lipid Extraction Method Guide, část č. 5994-1690EN, 2020.