Understanding system peaks in GPC/SEC for accurate and reliable analysis

Význam tématu

V objektivní analýze makromolekulárních vzorků pomocí GPC/SEC se kromě analytů objevují i systémové špičky. Ty vznikají při narušení rovnováhy mezi mobilní a stacionární fází a mohou vést k chybné identifikaci a kvantifikaci analyzovaných látek.

Cíle a přehled studie / článku

Studie demonstruje dvě osvědčené strategie pro identifikaci systémových špiček. První spočívá v překrytí chromatogramů prázdného a vzorkového vstřiku. Druhá využívá cílené přídavky jednotlivých složek mobilní fáze pro přiřazení původu každé špičky.

Použitá metodika a instrumentace

Analýza probíhala na přístrojovém uspořádání s pumpou AZURA P 6.1L, refraktometrickým detektorem RID 2.1L, DAD 6.1L, autosamplerem AS 6.1L a termostatem CT 2.1. Kolony SuperOH-P o délce 300 mm a průměru 8 mm pokrývaly rozsahy od 100 Da do 1000 kDa. Mobilní fáze tvořila PBS pH 7.4. Vzorky citrátu a ethylenglykolu byly filtrovány přes 0.45 μm CA filtr.

Hlavní výsledky a diskuse

• Překrytí chromatogramů identifikovalo dvě systémové špičky SP1 a SP2 na konci eluce.
• U kyseliny citrónové SP1 koliduje s analytem, což vytváří rameno na analytickém píku.
• Přidání jednotlivých iontů PBS (Na+, K+, dihydrogenfosfát, hydrogenfosfát) umožnilo přiřadit každou špičku konkrétní složce mobilní fáze.

Přínosy a praktické využití metody

• Spolehlivá identifikace systémových špiček zvyšuje přesnost kvantifikace makromolekul.
• Metoda zabraňuje chybám při vyhodnocení výsledků a zamezuje falešným pozitivům či negativům.
• Postupy lze implementovat v kvalitativní i kvantitativní kontrole v průmyslu i výzkumu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj se zaměří na automatizované algoritmy pro detekci a korekci systémových špiček, integraci strojového učení pro predikci jejich výskytu a vývoj nových univerzálních detektorů se zvýšenou stabilitou basové linky.

Závěr

Systematické ověřování chromatogramů prostřednictvím blanků a cílených přídavků mobilní fáze je nezbytné pro správnou interpretaci dat v GPC/SEC. Tyto postupy minimalizují chyby a zvyšují spolehlivost analýzy.

Reference

1. Srbek J., Coufal P., Bosáková Z., Tesařová E. System peaks and their positive and negative aspects in chromatographic techniques. Journal of Separation Science. 2005;28(12):1263–1270.
2. Levin S., Grushka E. System Peaks in Liquid Chromatography Their Origin Formation and Importance. Analytical Chemistry. 1986;58(8):1602–1607.
3. Held D., Gores F. Tips & Tricks GPC/SEC System Peaks or Ghost Peaks in GPC/SEC. LCGC International. 2019.