FRACTION COLLECTION FOR ISOLATING IMPURITIES IN FORCED DEGRADATION STUDIES

Význam tématu

Forced degradation analýzy jsou nezbytné pro pochopení stability farmaceutických látek a identifikaci degradačních cest. Správné stanovení relativních odezvových faktorů příměsí vůči účinné látce je klíčové pro přesnou kvantifikaci a udržení přesnosti hmotnostní bilance.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo izolovat produkty degradační analýzy (n-oxid a epoxid) z laboratorního stresu loratadinu a stanovit jejich relativní odezvové faktory RRF. Studie zahrnovala drobnoměřítkový sběr frakcí z chromatografické metody, stanovení RRF pomocí standardních kalibračních křivek a vyhodnocení vlivu RRF na hmotnostní bilanci.

Použitá metodika

Metoda sestávala z těchto kroků:

• Stresová degradace loratadinu s 3% H2O2 při 70 °C až 90 minut.
• Chromatografická analýza na UPLC s PDA a QDa detektorem na BEH C18 kolonu (2.1×50 mm) při 30 °C, objem injekce 4–10 µl, tok 0.6 ml/min, detekce 254 nm, SIR kanály 383.3 a 399.3 m/z.
• Sběr frakcí na kolonu XBridge BEH C18 (3.0×75 mm) s injekcí 30.6 µl a tokem 0.833 ml/min; přibližně 70 injekcí pro akumulaci dostatečného množství produktů.
• Pools frakcí, vysušení, lyofilizace a rekonstituce v metanolu pro následnou kvantifikaci.

Použitá instrumentace

• ACQUITY UPLC H-Class se 254 nm PDA detektorem a QDa MS detektorem (ESI+, 50–500 m/z).
• Waters Fraction Manager – Analytical pro programovatelný sběr frakcí.
• Kolony: ACQUITY UPLC BEH C18 1.7 µm (2.1×50 mm) a XBridge BEH C18 2.5 µm (3.0×75 mm).

Hlavní výsledky a diskuse

Byly izolovány dva hlavní produkty degradace: n-oxid (RT 2.616 min, ~76 % plochy) a epoxid (RT 3.828 min, ~0.9 % plochy). Získaná množství činila přibližně 188 µg n-oxidu a 12 µg epoxidu. Kalibrační křivky pro API i příměsi ukázaly vynikající linearitu (R2 > 0.996). Relativní odezvové faktory byly vypočteny jako 1.1 pro n-oxid a 0.2 pro epoxid. Aplikace RRF vedla ke korekci hmotnostní bilance, která se po úpravě přiblížila 100 % (původní hodnoty až 118 %, po korekci kolem 111 %). S postupujícím časem stresu rostl podíl n-oxidu (49 % po 90 min), zatímco epoxid se zvýšil jen mírně (z 0.6 na 0.9 %).

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje:

• Možnost izolace mikromnožství degradačních produktů analyticky.
• Přímé stanovení RRF pro přesnější kvantifikaci příměsí.
• Zlepšenou hmotnostní bilanci a validaci stability farmaceutických vzorků.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávané směry vývoje:

• Automatizace sběru frakcí a zpracování dat pro zvýšení propustnosti analýz.
• Integrované systémy pro online stanovení RRF během stresových experimentů.
• Rozšíření přístupu na další typy stresových podmínek a různé skupiny API.

Závěr

Mikroškálová kolekce frakcí kombinovaná se stanovením relativních odezvových faktorů představuje spolehlivý a reprodukovatelný přístup k izolaci a kvantifikaci degradačních produktů. Využití RRF významně zvyšuje přesnost kvantifikace a zlepšuje hmotnostní bilanci ve stresových studiích.

Reference

1. Chapter <621> CHROMATOGRAPHY United States Pharmacopeia and National Formulary USP 37-NF 32 S1 Baltimore, MD: United Book Press, Inc.; 2014. p. 6376-85.