ANALYSIS OF AMINO ACIDS IN PLANT-BASED PROTEINS AND PET FOODS – MODIFICATION OF AOAC 2018.06 TO FIT FOR NOVEL FOODS AND INGREDIENTS

Význam tématu

Analýza aminokyselin v rostlinných proteinech a krmivech pro domácí mazlíčky je klíčová pro zajištění kvality a detekci nežádoucího přídavku živočišných hydrolyzátů. Hydroxyprolin (HyPro) slouží jako biomarker pro odhalení gelatiny, kolagenu či falešného navýšení proteinu, což je zásadní pro kontrolu halal, kosher i veganských výrobků.

Cíle a přehled studie

Cílem úpravy metody AOAC 2018.06 bylo dosažení spolehlivého rozlišení a detekce všech běžných aminokyselin včetně HyPro při analýze vzorků krmiv a rostlinných proteinů. Studie zahrnuje optimalizaci gradientu, vyhodnocení chromatografické výkonnosti a ověření metodiky na reálných vzorcích.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky suchých a konzervovaných krmiv pro psy a kočky a rostlinných proteinových prášků byly homogenizovány, hydrolyzovány kyselinou a derivatizovány činidlem AQC dle postupu AOAC 2018.06.

• LC systém: ACQUITY Premier UPLC s PDA detektorem (UV 260 nm)
• Kolona: ACQUITY UPLC BEH C18, 1,7 μm, 2,1×150 mm
• Mobilní fáze A: AccQ∙Tag Ultra Eluent A:H₂O (1:20); fáze B: AccQ∙Tag Eluent B
• Průtok: 0,4 mL/min, teplota kolony 50 °C
• Vstřiková smyčka 1 μL, PLNO režim

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizovaný gradient umožnil dosažení USP rozlišení nad 2,0 pro kritické páry aminokyselin včetně HyPro. Metoda vykázala:

• Vysokou opakovatelnost i meziroční reprodukovatelnost retenčních časů
• Dostatečnou citlivost a lineární odezvu v rozsahu relevantních koncentrací
• Vyčistěné chromatogramy bez interferencí nad 6 minut až do 8,8 minuty, kde byly identifikovány všechny analyty

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje spolehlivý nástroj pro QA/QC laboratoře v potravinářském a krmivářském průmyslu. Umožňuje detekci potenciálního znečištění živočišnými produkty, ověření složení rostlinných proteininových směsí a plnění předpisových norem.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může zahrnovat coupling s hmotnostní spektrometrií pro vyšší selektivitu, rozšíření na další nově se objevující bílkovinné suroviny (hmyzí proteiny, fermentované produkty) a automatizaci přípravy vzorků pro vysokopropustné analýzy.

Závěr

Úpravou chromatografických podmínek původní metody AOAC 2018.06 bylo úspěšně dosaženo spolehlivého rozlišení a kvantifikace všech cílových aminokyselin včetně hydroxyprolinu. Metoda je ověřena na širokém spektru vzorků pet food a rostlinných proteinů a splňuje požadavky na přesnost i reprodukovatelnost.

Reference

Yang J., Rainville P., Harden S. Analysis of Amino Acids in Plant-Based Proteins and Pet Foods – Modification of AOAC 2018.06 to Fit for Novel Foods and Ingredients. Waters Corporation, 2025.