Feed Injection at Elevated Pressure Using the Agilent 1290 Infinity III Hybrid Multisampler

Význam tématu

Moderní analytika zbytků pesticidů vyžaduje vysoce citlivé a rychlé metody schopné současně stanovit stovky látek v komplexních matricích. Použití sub-2 µm stacionárních fází na sloupcích délky 150 mm umožňuje vynikající separaci, avšak při vyšších průtocích a injekčních objemech vzniká riziko rozšíření a deformace píků, což komplikuje automatickou integraci a snižuje kvantifikační přesnost.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem technického přehledu bylo demonstrovat, jak režim Feed Injection na Agilent 1290 Infinity III Hybrid Multisampleru přispívá k eliminaci šíření píků při vysokých injekčních objemech a tlacích až 1300 bar, a tím zlepšuje tvar píků, poměr signál/šum a dolní meze kvantifikace v multipesticidních LC/MS/MS metodách.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda využívala následující parametry:

• Kolona Agilent Poroshell 120 Phenyl-Hexyl (2,1×150 mm, 1,9 µm), teplota 55 °C
• Mobilní fáze: A) 5 mM amonného formiátu + 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě; B) téhož složení v methanolu; gradient od 5 % B do 100 % B během 9 min, průtok 0,6 mL/min
• Injekční režimy: klasický flow-through vs. Feed Injection (rychlost plnění 60 µL/min, overfeed 4 µL)
• Objemy injekce: 2, 5 a 10 µL

MS/MS parametry:

• Agilent Ultivo QqQ s Jet Stream zdrojem, režim dMRM, polarity v závislosti na složce
• Kapilární napětí: 4000 V (pozitivní), 3000 V (negativní); plyny: sušící a plášťový 10 L/min; teploty 200 °C; nebulizace 35 psi

Hlavní výsledky a diskuse

Porovnání obou injekčních režimů pro modelovou skupinu pěti pesticidů při injekčních objemech 2, 5 a 10 µL odhalilo:

• Při 2 µL byly pík y v obou režimech podobné, mírné zkreslení pouze pro první sloučeninu ve flow-through.
• Při 5 µL se ve flow-through režimu objevilo výrazné dělení a přední špička, zatímco Feed Injection udržel ostrý tvar píků.
• Při 10 µL flow-through režim vykazoval ztrátu píků mimo MRM okno a silné přední zkreslení u všech analyzovaných sloučenin; Feed Injection zachoval konzistentní pík y s jediným částečným rozšířením u prvních dvou látek.
• Feed Injection zlepšil LOQ v průměru 2–5× při 5 µL a až 25× pro později elujících pesticidů oproti flow-through; významné zvýšení citlivosti při vyšších injekcích.

Přínosy a praktické využití metody

Feed Injection režim nabízí:

• Možnost použití delších a jemněji plněných koloun při vysokém tlaku bez gradientního zpoždění
• Ostré pík y se zlepšeným poměrem signál/šum a nižšími LOQ
• Automatizovanou integraci bez nutnosti manuálních zásahů
• Zvýšenou robustnost analýzy při vyšších injekcích silně elučních roztoků

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj v oblasti vysokotlaké UHPLC s adaptivními injekčními režimy:

• Integrace Feed Injection s online vzorkovacími systémy pro vysokoprůtokové aplikace
• Optimalizace pro další typy biologických a potravinářských matric
• Pokročilé algoritmy automatické integrace založené na strojovém učení pro detekci deformací píků

Závěr

Feed Injection na Agilent 1290 Infinity III Hybrid Multisampleru významně zlepšuje kvalitu chromatografických píků a citlivost multipesticidních metod. Umožňuje spolehlivé stanovení stovek pesticidů při vyšších injekčních objemech a tlacích, aniž by docházelo k deformacím píků či nutnosti manuálních úprav integrace.

Reference

• Roy J.-F. a kol. A Sensitive and Robust Workflow to Measure Residual Pesticides and Mycotoxins from the Canadian Target List in Dry Cannabis Flower. Agilent application note 5994-0429EN, 2020.
• Naegele E. Improved Peak Shape and Lower LOQs in Pesticide Analysis. Agilent application note 5994-6125EN, 2024.