Quantitative Analysis of Four Long-Chain Lysophosphatidylcholines (LPCs) in Dried Blood Spot using Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry for Clinical Research

Význam tématu

Lysophosphatidylcholiny (LPCs) s dlouhým řetězcem jsou klíčovými biomarkery v lipidové metabolomice a klinickém výzkumu, například při sledování peroxizomálních poruch a dalších onemocnění spojených s metabolismem mastných kyselin.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a charakterizovat rychlou a spolehlivou metodu pro kvantifikaci čtyř dlouhých LPCs (C20:0, C22:0, C24:0, C26:0) v sušené kapce krve (DBS) pomocí UHPLC-MS/MS vhodnou pro klinický výzkum.

Použitá metodika

Extrahovalo se 3,2mm jádro DBS v methanolu se směsí stabilně značených interních standardů, agitací 30 min při pokojové teplotě. Analýza probíhala na ACQUITY UPLC I-Class PLUS FL systému s acetonitril-isopropanolovým gradientem obsahujícím 5 mM acetátu amonného. Detekce probíhala v režimu MRM v negativní ESI, akvizice signálu přes acetátové addukty.

Použitá instrumentace

• Chromatograf: Waters ACQUITY UPLC I-Class PLUS FL System
• Kolona: ACQUITY Premier CSH C18 2,1 × 50 mm, 1,7 µm
• Hmotnostní spektrometr: Xevo TQ-S micro MS s negativní ESI
• Software: MassLynx v4.2, TargetLynx XS v4.2

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala baseline rozlišení jednotlivých LPCs s pořadím eluce C20:0→C22:0→C24:0→C26:0; linearitu 0,1–10 µM (r2 ≥ 0,99); opakovatelnost a reprodukovatelnost ≤15 % CV; bias ≤20 %; nulový významný carryover; minimální matrixové efekty; nižší limit kvantifikace 0,1 µM a celkovou dobu analýzy 7 min na vzorek.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí jednoduchou extrakci, vysokou selektivitu a citlivost, krátký čas přípravy i analýzy a umožňuje zpracování až ~220 vzorků za 24 hodin. Je vhodná pro klinické studie metabilizmu lipidů a screening peroxizomálních onemocnění.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu na další lipidy a polarní sloučeniny
• Integrace plně automatizovaných pracovních postupů
• Multiplexní analýza více tříd metabolitů
• Miniaturizace a akcelerace analýzy pro vyšší throughput

Závěr

Navržená LC-MS/MS metoda pro kvantifikaci dlouhých LPCs v DBS je rychlá, robustní, reprodukovatelná a vhodná pro široké nasazení v klinickém výzkumu lipidové metabolomiky.

Reference

1. Santoyo-Castelazo A., Hammond G., Calton L.J. Quantitative Analysis of Four Long-Chain Lysophosphatidylcholines in Dried Blood Spot using Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry for Clinical Research. Waters Corporation, 2025.