A Simplified Approach to Optimizing the Oasis PRiME HLB 2 Step Protocol to Maximize Recoveries

Význam tématu

Odstraňování fosfolipidů z biologických vzorků je klíčové pro dosažení vysoké citlivosti a spolehlivosti LC-MS/MS analýz. Oasis PRiME HLB SPE nabízí rychlé čištění vzorků, které odstraňuje více než 95 % fosfolipidů, zjednodušuje laboratorní workflow a podporuje široké spektrum fyzikálně-chemických vlastností analyzovaných látek.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřuje na optimalizaci zjednodušeného dvoukrokového protokolu Oasis PRiME HLB tak, aby bylo možné zvýšit procentuální výtěžky analyzovaných látek a dosáhnout požadované citlivosti v bioanalytických metodách pomocí jediného experimentálního designu.

Použitá metodika a instrumentace

Protokol zahrnoval SPE pomocí Oasis PRiME HLB µ-elution destiček bez předchozí kondicionace. Použitá instrumentace:

• UPLC: ACQUITY Premier UPLC I-Class System s kolonkou ACQUITY Premier HSS T3 (2,1×50 mm, 1,8 µm)
• MS: Xevo TQ Absolute s ESI v pozitivním módu a akvizicí MRM
• Software: MassLynx v4.2 a TargetLynx v4.2

Optimální LC podmínky obsahovaly gradient 5–95 % organické fáze během 2 minut při průtoku 0,5 mL/min, teplotě kolony 55 °C a objemu injekce 5 µL.

Hlavní výsledky a diskuse

Při srovnání tří- a dvoukrokového protokolu byly výtěžky pro rozmanité analyty podobné, s výtěžky nad 80 % i pro nejpolárnější a nejnepolárnější látky. Střední až nízké výtěžky (méně než 60–80 %) pro některé sloučeniny byly dále zvýšeny optimalizací:

• Prednison: nejlepší výtěžek při eluční fázi 20:80 (vodní:organická)
• Atenolol: předúprava zásadou a eluční fáze 20:80
• O-Toludine: předúprava zásadou a eluční fáze 20:80
• Morphin: předúprava zásadou a 100 % organického eluentu
• Betamethasone-21-acetát: předúprava 4 % kyselinou fosforečnou a eluční fáze 20:80

Optimalizace byla provedena pomocí jediné destičky s kombinací předúpravy (kyselina/zásada) a rozpouštědla pro eluční krok.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduchý dvoukrokový protokol šetří čas a rozpouštědla
• Vysoké odstranění fosfolipidů (>95 %) zlepšuje kvalitu hmotnostní spektrometrie
• Flexibilita pro různé fyzikálně-chemické typy látek
• Možnost optimalizace v jediném experimentu pro specifické požadavky analýzy

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace s automatizovanými platformami a robotickými systémy
• Rozšíření aplikace na nové biologické matrice a surové vzorky
• Vývoj obměn sorbentů pro specializované analytické úlohy
• Implementace v klinických studiích a regulovaných QA/QC laboratořích

Závěr

Optimalizovaný dvoukrokový protokol Oasis PRiME HLB poskytuje rychlou, jednoduchou a vysoce účinnou metodu pro extrakci různorodých analyzovaných látek z biologických vzorků. Cílená optimalizace pro konkrétní látky prostřednictvím kombinace předúpravy a volby elučního rozpouštědla umožňuje dosáhnout požadované citlivosti v jediném experimentu.

Reference

• Tanna N., Plummer C. A Simplified Approach to Optimizing the Oasis PRiME HLB 2 Step Protocol to Maximize Recoveries. Waters Corporation, 2025.