Oh so sweet - Quantification of steviol glycosides in Stevia samples with RP-HPLC

Význam tématu

Steviol glykosidy obsažené v listech Stevia rebaudiana představují vysoce účinná přírodní sladidla s přibližně 400× vyšší sladivostí než sacharóza. Díky schválení v EU (2011) nacházejí široké uplatnění v potravinářství a nápojovém průmyslu. Absence hořkých až kovově chutnajících vedlejších produktů a neutrální vliv na glykemii je činí ideální náhradou běžných stolních cukrů pro diabetiky i osoby s nadváhou.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout rychlou a robustní RP-HPLC metodu pro současnou kvantifikaci šesti hlavních steviol glykosidů (rebaudiosid A, steviosid, rebaudiosid C, dulcosid A, rebaudiosid B, steviolbiosid). Metoda byla optimalizována simulacemi v DryLab softwaru a ověřena na dvou typech vzorků: extraktu ze sušených listů a komerčního sladidla.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky byly připraveny vodnou extrakcí, filtrace 0,45 µm a SPE čištěním na C18 cartridgích. Analýza probíhala na AZURA HPLC Plus systému s lineárním gradientem (A: voda, B: acetonitril) při průtoku 1,2 mL/min a teplotě 40 °C. Doba běhu činila 12 minut včetně reekvilibrace. Detekce probíhala na DAD při 210 nm s kontinuálním záznamem spektra 200–700 nm.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla baseline separace všech šesti glykosidů do 10 minut, přičemž kritický pár (rebaudiosid A / steviosid) byl plně rozlišen. Kvantifikace prokázala vysokou přesnost a opakovatelnost. Ve vzorku komerčního sladidla se rebaudiosid A nacházel ve 2,4 % namísto deklarovaných 3 %, přičemž byly detekovány také steviosid, rebaudiosid C a B. 3D PDA data prokázala čistotu elucí a nepřítomnost koelutujících příměsí.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá analýza (12 min) vhodná pro rutinní kontrolu kvality potravin a nápojů
• Vysoká robustnost umožňující spolehlivá měření i při drobných variačních podmínkách
• SPE příprava minimalizuje matrické interference a snižuje detekční meze

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metody na další deriváty steviol glykosidů a podobné přírodní sladidla
• Inline SPE a plná automatizace přípravy vzorků pro vyšší průchodnost
• Využití pokročilých modelovacích nástrojů (DryLab) pro rychlejší vývoj nových gradientních plánů
• Aplikace 3D PDA dat pro screening neznámých příměsí a sledování stability vzorků

Závěr

Navržená RP-HPLC metoda nabízí rychlou, přesnou a robustní analýzu šesti hlavních steviol glykosidů ve vzorcích z listů i komerčních sladidel. Optimalizované podmínky zajišťují spolehlivou separaci a selektivitu bez zbytečných matrixových vlivů, což je klíčové pro rutinní kvalitativně-kvantitativní kontroly v potravinářství.

Reference

1. Brandes T, Raters M, Matissek R. Steviolglycoside in Süßwaren – Entwicklung und Validierung einer Analysenmethode mittels HPLC-UV. DLR; 2013.
2. Borstel R. Fast online SPE purification of Stevia plant extracts. Application Note; 2011.
3. Chaturvedula VPS, Zamora J. Reversed-Phase HPLC Analysis of Steviol Glycosides Isolated from Stevia rebaudiana Bertoni. Food and Nutrition Sciences. 2014;5:1711–1716.