Analyzing cannabis flowers according to the German Pharmacopeia - monograph 2017

Význam tématu

Po legalizaci medicínského konopí v Německu v roce 2017 vzrostla potřeba přesných a reprodukovatelných metod HPLC pro stanovení hlavních kanabinoidů. Kvalitní analýza je nezbytná pro dodržení GMP, správné označení produktů a zajištění bezpečnosti pacientů.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a verifikovat robustní HPLC metodu podle monografie Německého lékopisu (DAB 2017) pro kvantifikaci šesti klíčových kanabinoidů (CBD, CBDA, CBN, Δ8-THC, Δ9-THC, Δ9-THCA) v květech lékařského konopí. Součástí bylo porovnání tří RP-C18 kolon a optimalizace chromatografických podmínek pomocí DoE a software DryLab.

Použitá metodika

Extrakt z rozemletého vzorku cannabis flower (500 mg) byl připraven trojnásobným extraktem 15 mL ethanolu, následnou centrifugací a 1:10 ředěním před injekcí. Chromatografická separace probíhala gradientem vody s H₃PO₄ (pH 1,6–2,8) a acetonitrilu, rychlost 1,0 mL/min, teplota 40 °C. DoE testoval vliv doby gradientu, teploty, pH a typu kolony na kritickou rozlišení Δ8-THC/Δ9-THC.

Použitá instrumentace

• Pumpa AZURA P 6.1L LPG
• Detektor AZURA MWD 2.1L (vlnové délky 225 nm a 306 nm)
• Autosampler AZURA AS 6.1L
• Termostat CT 2.1
• Kolony Eurospher II 100-3 C18, C18H, C18P (150 × 4,6 mm)
• Software Clarity Chrom 8.1, DryLab 4.3.4.2

Hlavní výsledky a diskuse

Modelování DoE ukázalo, že kolona C18P nabízí nejširší robustní prostor pH, teploty a gradientního času. Naměřené chromatogramy standardů potvrdily rozlišení kritické dvojice Δ8-THC/Δ9-THC s R=1,5 (DAB požaduje R>1,2). Analýza komerčního vzorku Bedrocan umožnila jednoznačnou identifikaci všech šesti kanabinoidů, přičemž méně intenzivní píky lze připsat matrici či minoritním kanabinoidům. Využití dvou vlnových délek zlepšilo rozlišení kyselých a neutrálních forem.

Přínosy a praktické využití metody

• Zajištění spolehlivého QA/QC u výrobců medicínského konopí.
• Shoda s požadavky německého lékopisu a GMP.
• Možnost rutinní automatizace a vysoké reprodukovatelnosti výsledků.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření spektra analyzovaných kanabinoidů a terpenoidů.
• Přechod na UHPLC a hyphenované techniky (LC–MS/MS) pro vyšší citlivost.
• Automatizované workflowy a on-line monitoring během pěstování.
• Implementace AI-podpory pro optimalizaci metodologie a predikci robustnosti.

Závěr

Metoda HPLC podle DAB 2017 s optimalizací DoE a kolonou C18P prokázala robustní separaci a kvantifikaci šesti hlavních kanabinoidů v květech medicínského konopí. Validace potvrdila splnění požadavků na rozlišení a reprodukovatelnost, což ji předurčuje pro rutinní kvalitativní i kvantitativní kontrolu.

Reference

1. Betäubungsmittelgesetz (BtMG) v platném znění, 2018.
2. Avoxa Mediengruppe Deutscher Apotheker: Deutsches Arzneibuch 2017, 2018.
3. Hoch E., Friemel C.M., Schneider M.: Cannabis. Eine wissenschaftliche Bestandsaufnahme, Springer 2018.
4. Grotenhermen F.: Endogene Cannabinoide und das Endocannabinoidsystem, v: Handbuch Psychoaktive Substanzen, Springer 2018.
5. EMEA: Guideline on Good Agricultural and Collection Practice (GACP) for Herbal Starting Materials, 2006.
6. Smith B.C.: Inter-Lab Variation in the Cannabis Industry, Cannabis Sci. Technol. 2019, Vol.2(2).