(C)an(n)alyze: determination of 16 cannabinoids inside flowers, oils and seeds

Význam tématu

Analytická stanovení kanabinoidů v rostlinných matricích (květy, oleje, semena) jsou klíčová pro zajištění kvality farmaceutických, potravinářských a kosmetických přípravků. Rychlé a spolehlivé metody umožňují přesné dodržení legislativních limitů psychoaktivních složek a standardizaci výrobních procesů.

Cíle a přehled studie

Studie rozšířila počet analyzovaných kanabinoidů z 6 na 16 oproti metodě Deutsches Arzneibuch 2017 a zaměřila se na zkrácení doby analýzy, optimalizaci gradientu a ověření přesnosti validací podle ICH Q2(R1) v souladu s požadavky AOAC.

Použitá metodika

Pro separaci kanabinoidů byla zvolena HPLC kolona C18 (Eurospher II 100×4,6 mm, 3 µm) s gradientem vody (pH 2,2 H3PO4) a acetonitrilu. Detekce probíhala při 228 nm a 306 nm pro odlišení neutralních a kyselých forem. Celková doba analýzy byla zkrácena o 20 minut oproti farmakopeálnímu postupu. Příprava vzorků (200 mg květů nebo semen, 50 mg oleje) dle Mudge et al. zahrnovala extrakci 80 % methanolem, ultrazvukem a filtraci PTFE 0,20 µm.

Použitá instrumentace

• Pumpa AZURA P 6.1 L LPG
• Detektor AZURA MWD 2.1 L (UV 228 a 306 nm)
• Průtoková kyveta 10 mm/10 µL PressureProof
• Autosampler AZURA AS 6.1 L
• Termostat kolon AZURA CT 2.1
• Kolona Eurospher II C18P, 100×4,6 mm, 3 µm
• Software ClarityChrom 8.1

Hlavní výsledky a diskuse

• V květech (bediol) detekováno až 11 kanabinoidů, v oleji 6 látek, v semenech žádné kanabinoidy nad mez detekce.
• Linearity kalibrací (0,15–75 µg/mL) vykázala korelační koeficient R>0,999.
• Opakovatelnost ploch píků v CBD oleji s RSD<1 %; recovery 95–105 % pro testované koncentrace.
• Mez stanovení 0,15 µg/mL (0,02 %) je řádově pod legislativním limitem 0,2 % Δ9-THC.
• Stopové množství CBNA potvrzuje senzorickou degradaci Δ9-THCA ve skladovaných vzorcích.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlou kontrolu kvality a dodržení právních požadavků při výrobě farmaceutických, potravinářských a kosmetických produktů na bázi Cannabis sativa. Podporuje standardizaci procesů a přesné značení aktivních složek.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Využití UHPLC a hmotnostní spektrometrie pro rozšířený panel kanabinoidů.
• Implementace „green chemistry“ minimalizující spotřebu organických rozpouštědel.
• Automatizace přípravy vzorků a on-line monitoring výrobních linek.
• Integrovaná validace v souladu s GMP pro farmaceutické a potravinářské procesy.

Závěr

Vyvinutá HPLC metoda pro stanovení 16 kanabinoidů poskytuje zkrácenou dobu analýzy, vysokou citlivost a přesnost. Validace dle ICH Q2(R1) a AOAC prokázala splnění farmakopeálních požadavků a legislativních limitů. Metoda je vhodná pro rutinní QA/QC kontrolu květů, olejů i semen konopí.

Reference

1. Deutsches Arzneibuch 2017, Deutscher Apotheker Verlag, 2018.
2. ICH Q2(R1): Validation of Analytical Procedures, 1995.
3. AOAC SMPR: Standard Method Performance Requirements for Cannabis, 2016.
4. Hoch E., Friemel C. M., Schneider M. Cannabis – Eine Wissenschaftliche Bestandsaufnahme, Springer, 2018.
5. Grotenhermen F. Endogene Cannabinoide und das Endocannabinoidsystem, Handbuch Psychoaktive Substanzen, Springer, 2018.
6. Betäubungsmittelgesetz (BtMG), znění 1981; novelizováno 2018.
7. Loxterkamp L., Monks K. Analyzing cannabis flowers according to the German Pharmacopeia, KNAUER, 2019.
8. Smith B. C. Inter-lab variation in the cannabis industry, Cannabis Science and Technology, 2019.
9. Mudge E. M., Murch S. J., Brown P. N. Leaner and greener analysis of cannabinoids, Analytica et Bioanalytica Chemica, 2017.