Spot-on UV/Vis accuracy with Lunatic & Stunner

Význam tématu

UV/Vis spektrofotometrie je klíčovou technikou pro přesné stanovení koncentrace proteinů a nukleových kyselin v biologických vzorcích. Správná kalibrace a ověření přístrojů zajišťuje důvěryhodnost výsledků a efektivitu analytických procesů ve výzkumu i průmyslové praxi.

Cíle a přehled studie

Tento dokument popisuje způsoby verifikace přesnosti, preciznosti a linearity UV/Vis mikročlunkových spektrometrů Lunatic a Stunner. Pro ověření výkonu byly využity standardy NIST (RM 8671 pro monoklonální protilátku, SRM 2082 pro stanovení dráhové délky) a certifikované standardy z kitu Fundamentals (L-tryptophan).

Použitá metodika a instrumentace

Všechny vzorky (2 µL) byly měřeny v oktuplu na pěti přístrojích Lunatic nebo Stunner. Postupy zahrnovaly:

• Veškeré měření provedené v pěti přístrojích s oktuplátní replikací
• NIST RM 8671: 10 mg/mL humanizovaná IgG1K protilátka v histidinovém pufru
• NIST SRM 2082: tryptophan a uracil v Tris pufru pro stanovení skutečné dráhové délky
• Fundamentals kit: L-tryptophan ve vodě s koncentracemi 1–8 mg/mL
• Software Lunatic & Stunner v7.0 s aplikací Fundamentals Check

Použitá instrumentace

Hlavními nástroji byly:

• Lunatic – mikroobjemový UV/Vis spektrometr s pevnou dráhovou délkou a možností měření 96 vzorků po 2 µL
• Stunner – kombinuje UV/Vis absorpci s dynamickým rozptylem světla (DLS) pro stanovení koncentrace, velikosti částic a polydisperzity
• Software Lunatic & Stunner v7.0 – průvodce nastavením, automatická analýza a reporting dat

Hlavní výsledky a diskuse

NISTmAb (10 mg/mL IgG1K): všechny koncentrace v rámci ±1 % od referenční hodnoty.
SRM 2082 (Tryptophan, Uracil): vypočítané dráhové délky v rámci ±2 % vůči nominálu 10 mm.
Fundamentals kit: průměrné obnovení koncentrace do 1 %, RSD <1 % a linearita s R² = 0,9999.
Proteinová řada ředění (HSA, IgG v PBS a acetátu): mezipřístrojová i intra-přístrojová preciznost a linearita až do 200 mg/mL s R² ≥ 0,9999.

Přínosy a praktické využití metody

Popisované postupy umožňují rychlé ověření provozní výkonnosti UV/Vis spektrometrů v biotechnologických a farmaceutických laboratořích. Nízký objem vzorku, certifikované standardy a automatizované vyhodnocení zkracují dobu analýzy a zvyšují spolehlivost výsledků.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření certifikovaných referenčních materiálů pro další biomolekuly, integrace s automatizovanými platformami a využití umělé inteligence pro prediktivní údržbu přístrojů a pokročilou analýzu dat. Zároveň narůstá poptávka po širším dynamickém rozsahu a rychlejších postupech verifikace.

Závěr

Lunatic a Stunner poskytují vynikající přesnost, preciznost a linearitu měření UV/Vis absorpce. Díky kombinaci NIST referencí a uživatelsky přívětivého softwaru lze jejich výkon rychle a spolehlivě ověřit napříč širokým rozsahem koncentrací.

Reference

1. National Institute of Standards and Technology. RM 8671 Humanized IgG1K Monoclonal Antibody. Gaithersburg, MD, USA, 2020.
2. National Institute of Standards and Technology. SRM 2082 Pathlength Absorbance Standards for Microliter Volume Spectrophotometers. Gaithersburg, MD, USA, 2020.
3. United States Pharmacopeia. Chapter 857 Ultraviolet-Visible Spectroscopy. USP 42, 2019.