Determination of Counter Ions of Synthetic Peptides Using Ion Chromatograph

Význam tématu

Quantifikace protipolohlavních iontů, zejména trifluoroctanu (TFA) a chloridu, u syntetických peptidů je nezbytná pro stanovení skutečného obsahu a čistoty lyofilizovaných vzorků. Správné určení těchto iontů ovlivňuje dávkování, stabilitu a bioekvivalenci peptidových léčiv.

Cíle a přehled studie

Cílem studie je ukázat možnosti simultánního stanovení TFA a chloridových iontů pomocí dvou typů iontové chromatografie: supresorového systému HIC-ESP a non-supresorového systému HIC-NS. Studie zahrnuje testování na reprezentativních syntetických peptidech (PTH a somatostatin).

Použitá metodika a instrumentace

V analýze byly použity iontové chromatografy Shimadzu:

• HIC-ESP (supresorový systém): kolony Shim-pack IC-SA2 a IC-SA2(G), mobilní fáze 12,0 mmol/l hydrogenuhličitanu sodného + 0,6 mmol/l uhličitanu sodného, průtok 1,0 ml/min, teplota 25 °C, detekce vodivostní.
• HIC-NS (non-supresorový systém): kolony Shim-pack IC-A3 a IC-GA3, mobilní fáze 8,0 mmol/l p-hydroxybenzoové kyseliny, 3,2 mmol/l Bis-Tris, 50 mmol/l boritan sodný, 50 % acetonitrilu, průtok 1,2 ml/min, teplota 40 °C, detekce vodivostní.

Hlavní výsledky a diskuse

Oba systémy poskytly dobře oddělené píky pro TFA a Cl– ve standardních i reálných vzorcích. Kvantifikace TFA vykázala poměry mezi naměřenou a teoretickou hodnotou 0,9–1,2 a pro Cl– přibližně 1,1 u obou systémů. Rozdíly mezi supresorovým a non-supresorovým přístrojem byly minimální a oba přístupy dosáhly požadované přesnosti.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje:

• spolehlivě ověřit čistotu a obsah syntetických peptidů,
• optimalizovat výběr přístroje podle požadavku na citlivost (HIC-ESP) nebo nákladovou efektivnost (HIC-NS),
• zkontrolovat výměnu TFA za jiné soli (např. chlorid) před dalším použitím ve farmacii.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření metody o:

• stanovení dalších protipolohlavních iontů,
• integrovanou detekci hmotnostní spektrometrií pro zvýšení selektivity,
• automatizované postupy přípravy vzorků a vysokoprůchodové analýzy v kvalitativních a výrobních laboratořích.

Závěr

Studie potvrdila, že oba typy iontových chromatografů poskytují stabilní a přesné stanovení TFA a chloridových iontů v syntetických peptidech bez závislosti na délce či sekvenci peptidového řetězce. Volba mezi HIC-ESP a HIC-NS umožňuje flexibilitu podle požadavků na citlivost nebo ekonomiku provozu.

Reference

Shimadzu Corporation: Application News “Determination of Counter Ions of Synthetic Peptides Using Ion Chromatograph” (2025)