Robust Column Performance for Wide Pore Size Exclusion Columns for Adeno-Associated Virus Particles (AAVs) Analysis

Význam tématu

Adeno-asociované viry (AAV) slouží jako nosiče genů pro terapeutické aplikace, přičemž přesné stanovení agregací a monomerů je klíčové pro zajištění bezpečnosti a kvality. Vysokorozlišující chromatografie gelovou permeací je standardní metodou pro detekci a kvantifikaci agregátů v AAV vzorcích.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo porovnat výkon nových Agilent AdvanceBio SEC 500 Å kolón s konkurenčními produkty v analýze různých serotypů AAV. Studie zhodnotila separační efektivitu, dobu analýzy a návratnost vzorků.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava mobilní fáze: 50 mM fosfátový pufr s 400 mM NaCl, pH 7.2, filtrace 0.2 µm
• Kolóny: AdvanceBio SEC 500 Å 2.7 µm 4.6×300 mm a 4.6×150 mm; konkurenční kolóny A 700 Å 3 µm a B 450 Å 2.5 µm (4.6×300 mm)
• Vybavení: Agilent 1290 Infinity II bio LC systém s diodovým detektorem a fluorescenčním detektorem
• Podmínky: průtok 0.35 mL/min, objem injekce 5 µL, teplota pokojová, doba běhu 15 min (300 mm) a <6 min (150 mm)
• Softwarová analýza: Agilent OpenLab CDS ChemStation

Hlavní výsledky a diskuse

AdvanceBio SEC 500 Å kolóny dosáhly u všech testovaných serotypů AAV základního rozlišení agregát/monomer s hodnotami Rs > 2.4 na kolóně 4.6×300 mm. Kratší 150 mm kolóna poskytla separaci s Rs = 1.64 a dobu analýzy pod 6 minut. Ve srovnání s konkurenčními kolónami bylo dosaženo vyšší rezoluce (až Rs 3.02 pro AAV9), nižšího faktoru špičkování a výjimečné reprodukovatelnosti. Díky vyššímu pórovému objemu AdvanceBio SEC dochází k výrazně lepšímu rozlišení a vyšší návratnosti vzorků (77.8 % vs 56.9–61.6 % pro AAV2, 88.1 % vs 71.8–75.2 % pro AAV9).

Přínosy a praktické využití metody

• Robustní a reprodukovatelná separace agregátů a monomerů pro různé serotypy AAV
• Zkrácení doby analýzy pro vysokopropustné laboratoře
• Vysoká návratnost vzorků zajišťuje precizní kvantifikaci
• Kompatibilita s běžně používanou biofarmaceutickou instrumentací

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace SEC s hmotnostní spektrometrií pro detailní charakterizaci
• Další optimalizace pórové chemie pro širší rozsah biomolekul
• Automatizované platformy pro vysokopropustné testování kvality
• Rozšíření aplikace na jiné virusové vektory a virové částice

Závěr

Agilent AdvanceBio SEC 500 Å kolóny s částicemi 2.7 µm poskytují vynikající separační výkon i vysokou návratnost při analýze agregátů AAV. Nabízejí rychlou a citlivou metodu vhodnou pro rutinní QC a výzkumné aplikace ve vývoji virových vektorů.

Reference

• Chromatographic Comparison of Wide Pore Size Exclusion Columns from Different Vendors, Agilent Technologies application note 5994-7934EN, 2024