DETERMINATION OF AFLATOXIN M1 IN MILK

Význam tématu

Aflatoxin M1 je vysoce toxický mykotoxin vznikající v organismu savců po konzumaci aflatoxinů B1 a B2. Jeho přítomnost v mléce a mléčných výrobcích představuje významné zdravotní riziko, jelikož je karcinogenní a rezistentní vůči běžným procesům skladování. Regulované limity (0,5 µg/L v EU a USA) vyžadují spolehlivou, citlivou a rychlou analytickou metodu pro kontrolu kvality.

Cíle a přehled studie

Cílem prezentované aplikace bylo vyvinout isokratickou HPLC metodu pro stanovení aflatoxinu M1 v mléce a surovém mléce s využitím online SPE přípravy vzorku a foto-chemické postkolonové derivatizace v UVE reaktoru. Metoda měla umožnit detekci na úrovni legislativního limitu a minimalizovat matrixové efekty.

Použitá metodika a instrumentace

Sample preparation:

• 20 mL mléka naředěno 30 mL destilované vody
• Online SPE na CHROMABOND C18 ec: kondice 10 mL methanolu, 10 mL vody; průchod vzorku; oplach 10 mL vody a 10 mL n-hexanu; sušení 10–20 min při 50 °C; eluace 3 mL acetonitrilu

Chromatografie:

• HPLC systém AZURA Analytical HPLC Plus: pumpa P 6.1L LPG, autosampler 3950, termostat CT 2.1
• Postkolonová derivatizace: UVE fotochemický reaktor
• Detekce: fluorescence RF-20Axs, Ex 365 nm/Em 455 nm, rychlost 5 Hz, časová konstanta 0,2 s, zisk 16
• Kolona: Eurospher II 100-3 C18, 150×3 mm; teplota 30 °C; isokratický režim 60:25:15 vody:methanolu:acetonitrilu; průtok 0,8 mL/min

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila kvantifikaci aflatoxinu M1 v koncentracích až 0,5 µg/L s dostatečnou citlivostí a selektivitou i při přítomnosti matrixu mléka. Fluorescenční chromatogram standardu 1 µg/mL a překrytí vzorku s přídavkem 0,5 µg/L prokázaly lineární odezvu a odlišení analytu od interferencí. SPE eliminovala většinu rušivých složek, fotochemická derivatizace zvýšila fluorescenční signál.

Přínosy a praktické využití metody

Nově vyvinutá metoda nabízí:

• Rychlé vyšetření (10 min běh)
• Minimální přípravu vzorku thanks online SPE
• Spolehlivou detekci na regulační úrovni
• Snadnou implementaci v rutinních laboratořích

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda lze rozšířit na hromadné screenování mléčných produktů s automatizovanou SPE a on-line datovou analýzou. Potenciál je také ve vývoji multi-mykotoxinových metod s paralelní derivatizací nebo integrací hmotnostní detekce pro širší spektrum kontaminantů.

Závěr

Použití isokratické HPLC s online SPE a UVE fotochemickou derivatizací poskytuje rychlý, citlivý a reprodukovatelný postup pro stanovení aflatoxinu M1 v mléce. Metoda splňuje legislativní požadavky a je vhodná pro rutinní monitorování kvality mléčných výrobků.

Reference

[1] FDA Mycotoxin Regulatory Guidance, NGFA, Washington D.C., 2011
[2] EC Regulation No 1881/2006, Official Journal of the European Union, 2006