New high-pressure valve to switch between four columns for easy HPLC method development

Význam tématu

Efektivní vývoj metod HPLC vyžaduje rychlé a spolehlivé vyhodnocení vhodné kolony pro separaci analytů. Manuální výměna kolón je časově náročná a náchylná k chybám, proto automatizované kolónové přepínání zvyšuje produktivitu a konzistenci výsledků.

Cíle a přehled studie

Cílem studie je představit nový vysokotlaký kolónový přepínač umožňující automatické přepínání mezi čtyřmi kolonami s bypassem a demonstrovat jeho přínos při vývoji HPLC metod. Pro ověření funkce byly testovány separační profily standardní směsi na čtyřech reverzních fázích za dvou gradientních podmínek.

Použitá metodika a instrumentace

Pro srovnání byly připraveny standardy fenolových a flavonoidních sloučenin (vanilová, syringová, p-kumarová, ferulová a benzoová kyselina, kvercetin, kaempferol) v koncentraci 0,1 mg/ml. Použity byly dvě gradientní eluce (voda/methanol a voda/acetonitril), kolony 150×3 mm, 3 µm, 100 Å (C8, C18, C18P, fenyl), průtok 0,6 ml/min, injekční objem 4 µl, teplota 25 °C, detekce DAD 275 nm.
Instrumentace:

• Pumpa AZURA P 6.1L HPG
• Autosampler AZURA AS 6.1L
• Diodový array detektor AZURA DAD 2.1L
• Termostat kolony AZURA CT 2.1
• Vysokotlaký přepínač kolón pro 4 kolony s bypassem
• Software ClarityChrom 9.1

Hlavní výsledky a diskuse

Gradient voda/methanol odhalil nedostatečné rozlišení na C8 fázi (nesepareované p-kumarová a ferulová kyselina), zatímco C18, C18P a fenyl fáze dosáhly baseline separace s nejrychlejším průběhem na C18P. Gradient voda/acetonitril vedl k obecně kratším retencím, přičemž nejrychlejší separace byla na C18 fázi. Automatizované přepínání umožnilo provést všechna měření v sérii bez manuálních zásahů.

Přínosy a praktické využití metody

Nový kolónový přepínač zjednodušuje a zrychluje vývoj HPLC metod, snižuje potřebu dvou ventilů a rozměry systému, eliminuje přepojování kapilár a minimalizuje riziko kontaminace či chybného zapojení.

Budoucí trendy a možnosti využití

Integrované řešení lze rozšířit o další solventní ventily pro screening mobilních fází, high-throughput analýzy, kombinaci s hmotnostní spektrometrií či aplikaci v QA/QC a průmyslové analytice.

Závěr

Nový vysokotlaký přepínač kolón pro čtyři kolony s bypassem prokázal spolehlivé a efektivní automatizované přepínání, které významně urychluje a zjednodušuje vývoj HPLC metod při zachování vysoké kvality separace.