Analysis of Tricyclic Antidepressant Drugs in Plasma for Clinical Research

Význam tématu

Analytická kvantifikace tricyklických antidepresiv (TCA) v lidské plas­mě je klíčová pro farmakokinetické studie, sledování terapeutické koncentrace a posouzení bezpečnosti léčby. Přesné a rychlé stanovení 15 sloučenin s širokým rozsahem polarity umožňuje výzkumným laboratořím podporovat personalizovanou medicínu a zlepšovat účinnost klinických studií.

Cíle a přehled studie

Metoda byla navržena pro klinický výzkum s cílem:

• Selektivně extrahovat a kvantifikovat 15 TCA s různou polaritou.
• Dosáhnout vysoké propustnosti analýzy (≤4,5 min/inj.) s nízkým objemem vzorku (50 µl).
• Zajistit robustnost, přesnost a shodu s externími schématy kvality (EQA).

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky byly připraveny pomocí proteinové precipitace přidáním 150 µl internal standardu v acetonitrilu k 50 µl plazmy. Po vortexování a centrifugaci se supernatant naředil a vstříkl do UPLC-MS/MS systému.

• Chromatograf: ACQUITY UPLC I-Class FTN se sloupcem XSelect Premier HSS C18 (2,1×100 mm, 2,5 µm).
• Mobilní fáze: voda a methanol obsahující 5 mM amonného formiátu a 0,1 % kyseliny formiové.
• Detekce: Xevo TQ-S micro s ESI+ v módu MRM (vysoce selektivní přechody analyzát–produkt).
• Software: MassLynx v4.2 s TargetLynx.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala:

• Úplné rozlišení izobarů (nortriptylin vs. protriptylin) a eliminaci rušivých přechodů.
• Minimální carryover z vysokých koncentrací (≤10 % bias po 1:5 ředění).
• Maticové efekty kompenzované internal standardy, průměrný faktor matice v rozmezí 0,85–1,15.
• Citlivost: LOQ splňující kritéria ≤20 % CV a ≤15 % bias.
• Linearity s r2>0,995 v celém kalibračním rozpětí.
• Přesnost a opakovatelnost: celková přesnost ≤8 % CV.
• Shoda s EQA schématy: průměrný bias <14,8 % u většiny látek.

Přínosy a praktické využití metody

Rychlý a ekonomický postup s nízkým objemem vzorku usnadňuje vysokopropustné sledování TCA v klinickém výzkumu. Vysoká selektivita a robustnost metody ji řadí mezi ideální nástroje pro farmakokinetické studie a monitorování terapie.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávané směry rozvoje:

• Rozšíření metod na nové psychoaktivní látky a jejich metabolity.
• Integrace s automatizovanými platformami pro vysokou propustnost laboratorních workflow.
• Využití umělé inteligence pro optimalizaci chromatografických podmínek a datové analýzy.
• Personalizované dávkování na základě rychlého vyhodnocení farmakokinetiky v reálném čase.

Závěr

Vyvinutá UHPLC-MS/MS metoda umožňuje selektivní, rychlou a cenově efektivní analýzu 15 tricyklických antidepresiv v lidské plazmě. Splňuje přísné požadavky na přesnost, citlivost, linearitu a shodu s externími kvalitními schématy, a je připravena pro aplikace v klinickém výzkumu.

Reference

• Gillman PK: Tricyclic antidepressant pharmacology and therapeutic drug interactions updated. British Journal of Pharmacology (2007) 151, 737–748.