Revolutionize your oligonucleotide analysis with game-changing DNAPac RP columns

Význam tématu

Analýza oligonukleotidů je nezbytná pro vývoj nových terapeutik, diagnostiku a výzkum nukleových kyselin. Efektivní a reprodukovatelná separace krátkých i dlouhých řetězců DNA/RNA usnadňuje charakterizaci, kvantifikaci a purifikaci biologicky aktivních molekul.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem dokumentu je představit semi-preparativní formát kolon DNAPac™ RP pro ion-pair reverzní fázovou chromatografii (IP-RP LC) a LC/MS separace oligonukleotidů. Ukazuje přenos analytických metod na vyšší stupně škálování bez ztráty rozlišení a vysokou průchodnost vzorků při purifikaci.

Použitá metodika a instrumentace

• Technika: Ion-pair reverzní fázová LC a LC/MS pro jedno- a dvouřetězcové nukleové kyseliny.
• Mobilní fáze: A = 100 mM TEAA, B = 75 % A + 25 % ACN s gradientní elucí.
• Kolony: Thermo Scientific™ DNAPac™ RP, polymer supermakroporézní 4 µm, pH 0–14, teplota až 110 °C.
• Formáty: analytický (2,1 × 100 mm) i semi-preparativní (21,2 × 150 mm), průtok 5–10 mL/min.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vysoké rozlišení fragmentů dsDNA (10, 20, 25 bp) na analytické i semi-preparativní koloně. Při škálování (průtok z 0,08 na 8 mL/min, objem injekce z 0,25 na 76,44 µL) zůstala zachována selektivita a špičkový tvar píků. Nízké průtoky umožňují použití běžných HPLC systémů a vyšší koncentrace eluovaných vzorků.

Přínosy a praktické využití metody

• Jedna kolona pro široké spektrum délek oligonukleotidů bez nutnosti výměny sorbentu.
• Bioinertní hardware minimalizuje adsorpci analyzátů a zkracuje dobu přípravy (bez passivace).
• Vysoká teplotní a pH stabilita zajišťuje robustnost v různých aplikacích.
• Škálovatelnost umožňuje hladký přechod z výzkumných protokolů na semi-preparativní purifikace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření aplikací do mRNA analýzy, glykolipidů a dalších biopolymerů. Integrace s vysoce výkonnými hmotnostními spektrometry zrychlí identifikaci posttranslačních modifikací. Další vývoj sorbentů může vést k lepší selektivitě pro strukturálně podobné sekvence.

Závěr

Thermo Scientific DNAPac RP semi-preparativní kolony představují spolehlivé řešení pro separaci a purifikaci oligonukleotidů při různých štádiích vývoje. Jejich robustnost, vysoké rozlišení a snadná škálovatelnost zefektivňují workflow včetně LC/MS aplikací.

Použitá instrumentace

• DNAPac™ RP semi-preparativní kolona, 4 µm, 21,2 × 150 mm
• DNAPac™ RP semi-preparativní guard cartridge, 4 µm, 21,2 × 10 mm
• Guard Cartridge Holder 21,2 mm I.D.