Tips for optimizing your UHPLC sensitivity and throughput

Význam tématu

Ultra-vysokoúčinná kapalinová chromatografie (UHPLC) představuje špičku v oblasti separační analýzy díky vynikajícímu rozlišení, citlivosti a stabilitě základní linie. V kombinaci s moderními detektory UV a hmotnostní spektrometrie umožňuje sledovat stopové nečistoty na úrovni 0,001 % primární složky. Vysoká přesnost a reprodukovatelnost metod UHPLC jsou rozhodující pro farmaceutický výzkum, kvalitativní a kvantitativní kontrolu a průmyslové aplikace, kde je nutná maximální spolehlivost a produktivita.

Cíle a přehled studie

Cílem prezentovaného posteru je poskytnout praktické doporučení pro optimalizaci citlivosti a propustnosti UHPLC metod. Autoři shrnuli klíčové aspekty přípravy vzorku, výběru rozpouštědel a pufrů, údržby chromatografického systému a doporučení pro volbu vhodných kolon, aby se minimalizovaly běžné problémy spojené s provozem při vysokém tlaku.

Použitá metodika a instrumentace

Studie vychází ze zkušeností s Agilent 1200 Infinity Series a 1290 Infinity LC systémy pro HPLC a UHPLC. Instrumentace zahrnuje:

• Narrow-bore a krátké kolony ZORBAX RRHD (1,8 µm, průměry 2,1 a 3,0 mm).
• Detektory UV (10 mm a 60 mm Max-Light Cartridge Cell) a MS systémy s nízkou hladinou kovových a organických nečistot v mobilní fázi.
• Vysokotlaké odnímatelné armatury a mikrotubusové výměnné spojky pro provoz až do 1200 bar.
• Filtrace vzorků a rozpouštědel pomocí nerezových filtrů (0,2 µm) a kompatibilních membrán.
• Modulární dvojitá čerpadla s možností seal wash pro ochranu těsnění čerpadla.

Hlavní výsledky a diskuse

Autoři upozorňují na klíčové kroky vedoucí k úspěchu UHPLC metod:

• Čistota vzorku: použití adekvátních technik přípravy (SLE, precipitační filtrace, SPE) výrazně snižuje zatížení kolony.
• Rozpouštědla a pufry: aplikovat výhradně certifikované HPLC/MS třídy; sledovat stopové kovy ≤ 5 ppb; přidávat pufry s opatrností (vhodné membrány, pravidelná výměna každých 24–48 h).
• Údržba systému: prevence nárůstu tlaku změnou filtrů při zvýšení o 10 bar, pravidelné servisní prohlídky a výměna těsnění a slitin čerpadla.
• Optimalizace průtoku a tepelného výměníku: úzké kolony (2,1 mm) pro tlaky > 600 bar, použití externího mikrotepelného výměníku pro stabilní teplotu a snížení objemu mrtvého prostoru.

Přínosy a praktické využití metody

Implementace popsaných zásad vede k vyšší citlivosti, opakovatelnému chromatografickému výkonu a delší životnosti kolony. Laboratoře dosahují lepšího poměru rozlišení a rychlosti analýzy, šetří rozpouštědla a snižují provozní náklady díky omezení servisu a výměn dílů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalším směrem je integrace UHPLC s vysokorozlišujícími hmotnostními spektrometry a automatizace přípravy vzorků pomocí robotických systémů. Vývoj nových pevných fází s ultraúzkými částicemi a hybridních povrchů bude dále posilovat kapacitu separace a odolnost proti zatížení matrice. V oblasti softwaru se očekává rozšíření nástrojů pro prediktivní modelování chromatografických podmínek.

Závěr

Poster nabízí souhrn osvědčených postupů pro optimalizaci UHPLC metod s důrazem na čistotu vzorku, kvalitu rozpouštědel, údržbu systému a volbu vhodné kolony. Dodržování doporučených zásad umožní dosáhnout vysoké citlivosti, propustnosti a spolehlivosti analýz.

Reference

V textu nebyly uvedeny explicitní odkazy na literaturu.