Primesep C Stationary Phase

Význam tématu

Primesep C představuje moderní stacionární fázi pro kapalinovou chromatografii kombinující reverzní fázi a iontovou výměnu v jednom ligandu. Díky možnosti pH-ovládání iontoměničových vlastností nabízí univerzální řešení pro separaci širokého spektra látek – zejména hydrofobních a bazických sloučenin. Metoda je navržena s ohledem na snadnou integraci do hmotnostní spektrometrie a umožňuje analýzu komplexních směsí pod MS-friendly podmínkami.

Cíle a přehled studie

Cílem dokumentu je demonstrovat výkonnost Primesep C ve smíšeně módní chromatografii při separaci základních, neutrálních i kyselých sloučenin s rozdílnými pKa a hydrofobicitou. Studie předkládá generic dual gradientní metodiku měnící současně obsah organické fáze a pH pufru pro dosažení optimální selektivity a rozlišení.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci byla použita kolonka Primesep C (50×3 mm, částice 5 µm). Metoda využívá dvou pufrů:

• Solvent A: 25 mM roztok NH4Ac (pH 5.0) s 10 % acetonitrilu
• Solvent B: 25 mM roztok NH4Form (pH 3.5) s 70 % acetonitrilu

Použitý gradient kombinuje nárůst podílu solventu B s poklesem pH mobilní fáze. Průtok byl 1,0 ml/min, detekce UV při 250 nm.

Hlavní výsledky a diskuse

Studie ukazuje, že při konstantním pH selhává separace silných bází (široké a zkreslené píky) nebo naopak nenastává retence polárních amínů. Dual gradientní přístup aktivuje iontovou výměnu nad pH 4 a potlačuje ji pod pH 3, což umožňuje:

• Retenci slabých bází v silně iontoměničovém režimu (vyšší pH)
• Eluci víceprotonovaných sloučenin snížením pH
• Současné rozlišení podle hydrofobicity organickým gradientem

Tabulka i grafy ukazují změnu povrchového náboje kolony a retence modelových sloučenin (kofein, benzonitril, dopamin, procainamid, benzylamin, aminopyridin, chlorfeniramin) v závislosti na pH.

Přínosy a praktické využití metody

Primesep C s dual gradientním protokolem přináší:

• Univerzální metodu pro QA/QC a výzkum v oblasti farmacie a chemického průmyslu
• MS-friendly podmínky bez nutnosti silných iontoměničových solí
• Vysokou selektivitu vůči látek s rozdílnými pKa a hydrofobicitou

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávané směry rozvoje:

• Integrace automatizovaného pH gradientního řízení
• Rozšíření na dvourozměrné chromatografické systémy
• Kompatibilita s ultra­výkonnou LC-MS pro vysoce citlivé analýzy
• Optimalizace ligandů pro specifické aplikace (peptidy, ionty kovů)

Závěr

Primesep C nabízí flexibilní a vysoce účinný přístup k separaci komplexních směsí kombinuje reverzní fázi a iontovou výměnu s možností ovládání pH. Dual gradientní metoda umožňuje kvalitní rozlišení širokého spektra látek pod MS-friendly podmínkami.

Reference

• SIELC Technologies, Inc. Primesep C Stationary Phase Application Note, 2002–2004.