Efficient Method Optimization of Semaglutide Analysis Using an Agilent 1260 Infinity II Bio Prime LC System and Blend Assist

Význam tématu

Purity test semaglutidu je klíčovým krokem v zajištění bezpečnosti a účinnosti léčiva pro léčbu diabetu a obezity. Impurity level pod 0,5 % podle FDA vyžaduje vysoké rozlišení mezi peptidovou formou léčiva a stopovými nečistotami. Modifikace molekuly, která prodlužuje účinek, zvyšuje hydrofobicitu a interakci se systémem, takže je potřeba robustní chromatografická sestava.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout a optimalizovat HPLC metodu pro test čistoty semaglutidu pomocí systému Agilent 1260 Infinity II Bio Prime LC s funkcí Blend Assist. Studie se zaměřila na vliv koncentrace kyselého modifikátoru TFA na separaci nečistot a porovnání impuritního profilu syntetického API a formulovaného přípravku Ozempic.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika zahrnovala screening TFA v rozmezí 0,05–0,50 % za použití dvou sloupců AdvanceBio Peptide Plus (2,1×150 mm pro screening, 2,1×250 mm pro finální posouzení) při průtoku 0,4 ml/min a teplotě 40 °C. Gradient s proměnnou poměrnou vodní a acetonitrilové fáze s přídavkem TFA umožnil jemné ovládání retence peptidů.
Instrumentace:

• Agilent 1260 Infinity II Flexible Pump (G7131C) s funkcí Blend Assist
• Agilent 1290 Infinity II Bio Multisampler (G7137A) s termostatem
• Agilent 1290 Infinity II Multi-Column Thermostat (G7116B) s Bio Standard Flow
• Agilent 1290 Infinity II Diode Array Detector (G7117B) s Bio-inert Max-Light 60 mm článkem

Reagencie zahrnovaly TFA (Merck) a acetonitril (B&J). Vzorky semaglutidu API a Ozempicu byly připraveny v 30 % acetonitrilu při koncentraci 1 mg/ml a zahřáty na 80 °C po dobu 24 h před analýzou. Pro zpracování dat byl použit Agilent OpenLab CDS 2.7.

Hlavní výsledky a diskuse

Screening koncentrací TFA ukázal, že kolona AdvanceBio Peptide Plus zachovává stabilní výkon i při 0,5 % TFA. Nejlepší rozlišení nečistot bylo dosaženo při 0,40–0,50 % TFA. Systém udržoval konzistentní retenci i při velmi pozvolném gradientu (~0,17 %/min) a silných kyselých podmínkách. Díky Max-Light článku bylo možné detekovat nečistoty pod 0,01 %. Porovnání API a Ozempicu potvrdilo vyšší rozlišení a spolehlivou detekci stopových komponent.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlou optimalizaci separace peptidů a správu nečistot díky funkci Blend Assist. Bio-inertní cesta a AdvanceBio kolona zajišťují minimální interakci a stabilní výkon v QA/QC laboratořích. Vysoké rozlišení podporuje standardizaci syntetických peptidů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Předpokládá se širší nasazení automatizace a strojového učení pro návrh gradientů a voleb modifikátorů. Systém lze adaptovat na další terapeutické peptidy a biologické makromolekuly. Vysokopropustné platformy a online monitorovací systémy nabídnou nové příležitosti v GMP prostředí a rozsáhlých screeningových studiích.

Závěr

Agilent 1260 Infinity II Bio Prime LC ve spojení s AdvanceBio Peptide Plus kolonu a funkcí Blend Assist zajišťuje rychlou, robustní a vysoce rozlišenou metodu pro impuritní testy semaglutidu. Metoda je vhodná pro rutinní QA/QC i vývojové laboratoře.

Reference

• Stefan M. Regulatory Challenges of Nanomedicines and Their Follow-on Versions: A Generic or Similar Approach? Advanced Drug Delivery Reviews 2018, 131, 122–131.
• ANDAs for Certain Highly Purified Synthetic Peptide Drug Products That Refer to Listed Drugs for rDNA Origin, FDA CDER, 2021.
• Guideline on the Development and Manufacture of Synthetic Peptides, European Medicines Agency, 2023.
• Minzhi Y. et al. Battle of GLP-1 Delivery Technologies. Advanced Drug Delivery Reviews 2018, 130, 113–130.
• Melanie M.; Clarissa D. Agilent 1260 Infinity II Flexible Pump with Blend Assist. Agilent Technologies Technical Overview 2018, publication 5991-9088EN.