Determination of Nitrosamine Impurities and NDSRI in Anti-diabetic Drugs on Shimadzu LCMS-8060NX

Význam tématu

Detekce nitrosaminů v léčivých přípravcích je klíčová z hlediska pacientovy bezpečnosti. Tyto sloučeniny jsou potenciálně karcinogenní a jejich přítomnost může vystavit pacienty nebezpečí. Regulátoři po celém světě stanovili přísné limity pro nitrosaminy v léčivech, což vyžaduje vysoce citlivé a spolehlivé analytické metody.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout jednoduchou, citlivou a robustní metodu pro kvantifikaci deseti nitrosaminových nežádoucích látek (včetně NDSRI) v antidiabetických lécích za použití Shimadzu LCMS-8060NX v režimu MRM po APCI ionizaci. Metoda má umožnit rychlou analýzu s minimální přípravou vzorku a splnit požadavky EMA a FDA.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky: Syntetické standardy nitrosaminů (Toronto Research Chemicals, Restek) v LCMS metanolovém zásobním roztoku, ředěné pro kalibraci (0,1–10 ng/mL). Lékové vzorky drcené, extrahované ultrapurovou vodou (100 mg API/1 mL), sonikace, centrifugace, filtrace 0,22 µm.

• Chromatografie: Nexera XS LC-40, kolona Shim-pack Scepter C18-120 (150×3,0 mm, 1,9 µm), 0,1 % kyselina mravenčí voda/methanol, gradient 28 min, 0,4 mL/min, 45 °C, injekční objem 10 µL.
• Hmotnostní spektrometrie: LCMS-8060NX, APCI, MRM pozitivní režim, heat block 200 °C, DL 200 °C, interface 400 °C, N2 nebulizační 4,4 L/min, sušící 10 L/min.

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrace deseti nitrosaminů prokázala v rozsahu 0,1–10 ng/mL vynikající linearitu (R² > 0,999). Limity kvantifikace (LOQ) jsou pod 10 % povoleného limitu EMA. Přesnost metody (% RSD) byla <10 % na LOQ a přesnost stanovení (% accuracy) v mezích ±20 % dle ICH. Studie obnovy ukázala 74,5–119,4 % v testovaných vzorcích D1 a D2. Analýza reálných antidiabetik odhalila přítomnost NPYR (až 19,4 ppb) a NTTP (až 170 ppb) v některých vzorcích. Ostatní nitrosaminy nebyly detekovány nebo pod LOQ.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou citlivost a přesnost při minimálních nárocích na přípravu vzorku. Malý injekční objem šetří spotřebu rozpouštědel. Díky jednoduché úpravě chromatografických podmínek lze analýzu přizpůsobit různým farmaceutickým matricím. Metoda je vhodná pro rutinní QA/QC laboratoře i výzkumné účely.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu rutinně monitorovaných nitrosaminů a NDSRI na další třídy léčiv.
• Automatizace přípravy vzorků a datové vyhodnocení pomocí strojového učení.
• Integrace ultra-vysokoúčinné chromatografie (UHPLC) pro zkrácení doby analýzy.
• Použití alternativních ionizačních zdrojů (např. ESI v kombinaci s APCI) pro širší pokrytí polárních látek.
• Vývoj standardizačních materiálů a kalibrací přímo v maticích pro vyšší spolehlivost ve farmaceutické kontrole.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda na Shimadzu LCMS-8060NX prokázala vysokou citlivost, přesnost a opakovatelnost pro stanovení deseti nitrosaminů v antidiabetických lécích. Splňuje regulační požadavky a je snadno adaptovatelná pro různé přípravky. Je ideální pro rutinní kontrolu kvality a prevenci karcinogenních rizik.

Reference

• FDA (2021). Nitrosamines as Impurities in Drugs – Health Risk Assessment and Mitigation Public Workshop.
• EMA. Nitrosamine impurities.
• FDA (2020). Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs.
• HSA (2018). Nitrosamine impurities in medicines.