Deploying the Alliance™ iS Bio HPLC System as a Modern HPLC for Biopharmaceutical Analysis in QC Environments

Význam tématu

Biotechnologické léčivé látky, zejména oligonukleotidy, představují rostoucí třídu terapeutik díky své specifické vazbě na cílové molekuly a minimálním vedlím účinkům. Kvalitní kontrola (QC) těchto látek vyžaduje spolehlivé chromatografické metody s minimalizovaným interakcím mezi analytickou cestou a kovovými povrchy, které mohou snižovat obnovu a přesnost analýzy.

Cíle a přehled studie

Studie porovnává novou HPLC platformu Alliance iS Bio s technologií MaxPeak HPS proti tradičnímu systému s cílem:

• Ověřit zvýšení citlivosti a obnovy oligonukleotidů
• Urychlit přenos a modernizaci analytických metod
• Snížit spotřebu vzorku, rozpouštědel a dobu analýzy

Použitá metodika a instrumentace

Metodika stavěla na iontově párové obrácené fázi (IP-RPLC) s hexylammonium acetátem jako párovacím činidlem. Porovnávaly se dvě vzorky: standardní směs oligodeoxythymidinů (15–35 mer) a terapeutický kandidát GEM91 (25 mer phosphorothioat).

Použitá instrumentace

• HPLC systémy: Alliance iS Bio HPLC System a Legacy system
• Detekce: UV při 260 nm (2489 UV/Vis a TUV detektor)
• Kolony: XBridge BEH C18 a XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18
• Řídicí software: Empower 3 a Intelligent Method Translator App

Hlavní výsledky a diskuse

Porovnání citlivosti na 20 mer štěp ukázalo až 30 procentní nárůst výšky signálu a 15 procentní nárůst plochy píku při použití bio-inertního systému a Premier kolony. Technologické povrchové úpravy MaxPeak HPS snižují interakci fosfátového řetězce s kovovými částmi. Přenos metod pomocí aplikace iMTA proběhl bez chyb a umožnil zvýšení poměru signál/šum až o 40 procent u stopových nečistot GEM91. Díky podpoře tlaků do 10 000 psi bylo možné přejít na menší částice 2,5 µm a kratší kolony, čímž se zkrátila doba běhu až trojnásobně při zachování separační výkonnosti.

Přínosy a praktické využití metody

Nová platforma přináší:

• Vyšší obnovu a reprodukovatelnost analýz oligonukleotidů
• Rychlejší přenos a validaci metod
• Snížení spotřeby vzorků, rozpouštědel a času na analýzu
• Zjednodušenou optimalizaci gradientu díky čtyřkanálové solventní směšovačce

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření bio-inertních HPLC systémů v regulovaných QC laboratořích a podpora nových biologických modulit včetně mRNA vakcín a genové terapie. Další možnosti představují automatizovaná rozhraní pro přenos metod mezi různými značkami HPLC a propojitelnost s pokročilými bioinformatickými nástroji.

Závěr

Alliance iS Bio HPLC System s technologií MaxPeak HPS přináší výrazné zlepšení v citlivosti, obnově a efektivitě analýzy oligonukleotidů ve QC prostředí. Moderní tlaková kapacita a pokročilá solventní architektura podporují rychlou optimalizaci metod, šetří čas a náklady a excelují v reprodukovatelnosti výsledků.

Reference

1. Chen Ziyi et al. Global research on RNA vaccines for COVID-19 from 2019 to 2023: a bibliometric analysis. Vaccines and Molecular Therapeutics, 2024.
2. Koshel BM, Birdsall RE, Yu YQ. Improving Recovery and Quantitation of Oligonucleotide Impurities Using ACQUITY Premier with MaxPeak HPS Technology. Waters Application Note 720007238, 2021.
3. Gilar M, Li Z, MacLean J. Improved Chromatographic Analysis of Oligonucleotides with ACQUITY Premier Oligonucleotide BEH C18 Columns. Waters Application Note 720007012, 2023.
4. Brennan K et al. Improved Oligonucleotide SPE-LC-MS Analysis Using MaxPeak High Performance Technology. Waters Application Note 720007019, 2020.