Fast and Easy Separation of 23 Drugs of Abuse Including High, Stable Resolution of Isobaric Opioids from Human Urine by UHPLC-MS/MS

Význam tématu

Rychlý a spolehlivý screening omamných látek v lidských močových vzorcích je klíčový pro klinické laboratoře, toxikologii i forenzní aplikace. Metody s vysokou propustností a stabilními chromatografickými parametry umožňují efektivní detekci a kvantifikaci širokého spektra látek a minimalizují riziko falešně pozitivních či negativních výsledků.

Cíle a přehled studie / článku

Představený článek popisuje vývoj a validaci rychlé UHPLC–MS/MS metody pro separaci a kvantifikaci 23 vybraných drogově zneužívaných látek z naředěné lidské moči. Hlavními cíli bylo dosažení kompletního rozlišení isobarických opioidů a dalších analyzovaných skupin při velmi krátkém analytickém čase, vysoké robustnosti kolony a stálosti klíčových chromatografických parametrů během až 1000 opakovaných injekcí.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek: 100 µl kontrolované moče doplněné na objem 1 000 µl 0,1 % kyseliny mravenčí
Chromatografie a detekce:

• Systém UHPLC Thermo Scientific Vanquish Horizon
• Kolona Accucore Biphenyl 2,6 µm (50 × 2,1 mm)
• Mobilní fáze A: 0,1 % kyselina mravenčí ve vodě, B: 0,1 % kyselina mravenčí v metanolu
• Gradientní program: 0–0,15 min 95 % A, 4,0 min 0 % A, 4,6 min návrat na 95 % A, celkový cyklus 5,5 min
• Tok 0,75 ml/min, teplota kolony 45 °C, objem injekce 2 µl
• Detekce: TSQ Quantiva Triple-Stage Quadrupole MS s ionizačním zdrojem HESI-II v pozitivním režimu, režim MRM
• Software: Chromeleon 7.2.8 pro řízení a zpracování dat

Hlavní výsledky a diskuse

Balistický gradient o délce 4 minut poskytl ostré a dobře vyhraněné špičky pro všechny analyzované látky. Kritické páry isobarických opioidů (morphine/hydromorphone, codeine/hydrocodone) vykazovaly vynikající rozlišení již po desáté injekci a tato kvalita se udržela až do 1000. injekce. Variabilita retenčních časů (CV) byla pro morphine 2,49 %, pro alprazolam 0,07 % a pro 11-hydroxy-THC 0,14 %. Šířky špiček na polovině výšky a asymetrie špiček zůstaly stabilní napříč celou sadou injekcí, což prokazuje vysokou robustnost kolony Accucore Biphenyl.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí rychlý cyklus analýzy (5,5 min) a jednoduchou úpravu vzorku vhodnou pro automatizaci. Vysoká účinnost a stabilita chromatografického systému minimalizují údržbu a riziko selhání při rozsáhlých screeninzích. Díky spolehlivému rozlišení isobarických látek napomáhá předcházet mylným interpretacím výsledků.

Budoucí trendy a možnosti využití

Automatizace předúpravy vzorků a integrace s laboratorními informačními systémy mohou dále zvýšit propustnost a spolehlivost analýz.
Rozšíření aplikace na další skupiny psychoaktivních a terapeutických látek podpoří širší uplatnění v toxikologii, forenzní chemii, dopingové kontrole i QA/QC v průmyslové analytice.

Závěr

Popisovaná UHPLC–MS/MS metoda s kolonnou Accucore Biphenyl 2,6 µm umožňuje rychlou, spolehlivou a vysoce robustní separaci 23 látek z lidské moči. Stabilita parametrů během až 1000 injekcí potvrzuje vhodnost pro náročné klinické a forenzní aplikace.

Reference

1. Find out more at www.thermofisher.com/appslab
2. Find out more at www.thermofisher.com/biphenyl