Quantitation of N-nitroso propranolol (NOP) in Propranolol formulation and its placebo using LC-MS/MS

Význam tématu

N-nitroso propranolol (NOP) je vysoce karcinogenní nečistota vznikající v léčivu propranolol. Její přítomnost i v nízkých hladinách ohrožuje bezpečnost pacientů a kvalitu farmaceutických přípravků. Regulace a kontrola nitrosaminů je proto klíčová pro zajištění souladu s požadavky regulačních úřadů a pro ochranu zdraví.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem studie bylo vyvinout a validovat citlivou a selektivní metodu pro kvantifikaci NOP v hotových formulacích propranololu a ve vzorcích placebo. Studie zahrnovala:

• Optimalizaci LC-MS/MS podmínek pro separaci a detekci.
• Stanovení linearity, meze detekce (LOD) a meze kvantifikace (LOQ).
• Aplikaci metody na reálné vzorky formulací a placebo.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda spočívá v separaci na UHPLC Nexera X3 spojené s triple kvadrupólovým hmotnostním spektrometrem LCMS-8060NX (APCI). Klíčové body:

• Kolona Shim-pack Scepter C8 (3×150 mm, 5 µm).
  Mobilní fáze A: 0,1% kyselina mravenčí ve vodě.
  Mobilní fáze B: 0,1% kyselina mravenčí v methanolu.
  Gradientní program 0–3 min 50% B, 3–8 min 50–100% B, 8–13,5 min 100% B, 13,5–16 min návrat na 50% B.
  Průtok 0,5 mL/min, objem injekce 30 µL, teplota kolony 40 °C.
• Detekce v režimu MRM: přechody 288,85→72,15 (kvantifikační) a 288,85→259,15 (kvalifikační).
• Optimalizace kolizních energií pomocí automatizovaného nástroje LabSolutions.
• Příprava vzorku: vážení 25 mg propranolol HCl, ředění vodou/acetonitrilem (1:1), centrifugace, filtrace 0,22 µm PTFE.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vysokou linearitu v rozsahu 10–4000 ppb (r2 ≥ 0,999). LOD a LOQ byly stanoveny na 2,0 ppb, respektive 10,0 ppb s %RSD pod 8 %:

• Kalibrační křivka: y = 36769,33x + 428,53 (r2 = 0,99900).
• Vzorky formulací obsahovaly NOP v hladinách 3640–3968 ppb, překračující limit.
• Vzorky placebo neobsahovaly detekční hladiny NOP, v navrženém testu byla prokázána účinnost extrakce a analýzy.
• Recovery studie ve vzorku placebo doplněném o 10 ppb a 20 ppb vykázaly 104 % a 119 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rutinní sledování stopových hladin NOP v surovinách i hotových formulacích. Představuje nástroj pro QA/QC laboratoře farmaceutických společností a podporu shody s regulačními požadavky v oblasti nitrosaminových kontaminantů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj v oblasti automatizace přípravy vzorků, vysokorychlostní analýzy a integrace s vysoce přesnou hmotnostní spektrometrií. Rozšíření aplikace na další třídy N-nitrosaminů pomůže komplexně pokrýt bezpečnostní profil léčiv.

Závěr

Byla úspěšně vyvinuta a validována citlivá LC-MS/MS metoda pro určování N-nitroso propranololu v léčivých formulacích. Metoda splňuje požadavky na nízké meze detekce a kvantifikace a poskytuje spolehlivé výsledky pro kontrolu kvality.

Reference

1. King FJ, Searle A, Urquhart MW. Process Res. Dev. 2020, 24(12), 2915–292.
2. Partani P. et al. J Pharm Biomed Anal. 2009 Dec 5;50(5):966–976.
3. Robbiano L, Martelli A, Allavena A, Mazzei M, Gazzaniga GM, Brambilla G. Cancer Res. 1991 May 1;51(9):2273–2279.
4. Brambilla G, Martelli A, Sottofattori E. Carcinogenesis. 1995;16(5):1239–1242.